ICS 71.100.70 Y 42 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T30087—2013 化妆品中保泰松含量的测定方法 高效液相色谱法 Determination of pheylbutazone in cosmetics by high performance liquid chromatography method 2013-12-17发布 2014-03-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T30087—2013 前言 本标准按照GB/T1.1—2009和GB/T20001.4—2001给出的规则起草， 本标准起草单位：国家化妆品质量监督检验中心（北京）、北京市海淀区产品质量监督检验所、中检 联盟（北京）质检技术研究院。 本标准主要起草人：王浩、刘艳琴、史海良、杨红梅、穆同娜、田艳玲。 I GB/T30087—2013 化妆品中保泰松含量的测定方法 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了化妆品中保泰松含量的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于水剂类、膏霜乳液类、唇膏类等化妆品中保泰松的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 样品经含2%氨水的甲醇溶液超声提取，富集提取液后，用高效液相色谱仪测定，外标法定量，液相 色谱/质谱确证。 4试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1氨水。 4.2 乙酸铵。 4.3 氯化钠。 4.4 四氢呋喃：色谱纯。 4.5 甲醇：色谱纯。 4.6 乙睛：色谱纯。 4.7 2%氨水的甲醇溶液：移取10mL氨水（4.1)至500mL容量瓶中，甲醇（4.5）定容。 4.8 乙+甲醇（1十2，V/V）：量取250mL乙腈（4.6）与500mL甲醇（4.5）混合。 4.92 20mmoL/L乙酸铵溶液：称取1.54g乙酸铵（4.2）置于烧杯中，加水溶解并定容至1000mL。 4.10 保泰松标准样品：具体信息见表1。 表1保泰松标准样品信息 中文名称 英文名称 CAS登录号 分子式 相对分子质量 纯度 保泰松 Phenylbutazone 50-33-9 CH2 N, O 308.38 ≥99% 4.11标准储备液：准确称取0.1g标准样品（4.10），精确至0.0001g，于50mL烧杯中，加适量甲醇 （4.5）溶解后移人100mL棕色容量瓶中，用甲醇（4.5）定容。该溶液于一18℃以下保存，可保存六 个月。 1 GB/T30087—2013 溶液，质量浓度分别为：0.200μg/mL、1.00μg/mL、2.50μg/mL、5.00μg/mL、10.0μg/mL、 20.0 μg/mL。 4.13滤膜：0.45um，有机相。 5仪器与设备 5.17 高效液相色谱仪：配二极管阵列或紫外检测器 5.2 液相色谱/质谱仪：配有电喷雾离子源。 5.3 分析天平：感量分别为0.0001g和0.001g。 5.4走 超声波清洗器。 5.5 旋转蒸发仪。 5.6 涡旋混合器。 6分析步骤 6.1样品制备 6.1.1水剂类样品 称取1.0g样品，精确至0.001g，置于10mL比色管中，用含2%氨水的甲醇溶液（4.7）定容。超声 提取10min，经滤纸过滤，过0.45μm有机相滤膜（4.13），滤液用液相色谱仪测定。 6.1.2膏霜乳液类样品 称取0.5g样品，精确至0.001g，置于25mL比色管中，用含2%氨水的甲醇溶液（4.7）定容。超声 提取20min，经滤纸过滤如有浑浊或乳化现象，加入0.2g的氯化钠（4.3），吸取15mL滤液至 100mL蒸发瓶内，于45℃水浴中减压蒸馏至近干，用3mL含2%氨水的甲醇溶液（4.7）溶解，过 0.45μm有机相滤膜（4.13），滤液用液相色谱仪测定。 6.1.3唇膏类样品 称取0.5g样品，精确至0.001g，置于25mL比色管中，先加人1mL四氢呋喃（4.4），涡旋混匀，再 用含2%氨水的甲醇溶液（4.7)定容。超声提取20min，经滤纸过滤[如有浑浊或乳化现象，加人约0.2g 的氯化钠（4.3）]，吸取15mL滤液至100mL蒸发瓶内，于45℃水浴中减压蒸馏至近干，用3mL含 2%氨水的甲醇溶液（4.7）溶解，过0.45μm有机相滤膜（4.13），滤液用液相色谱仪测定。 6.2测定 6.2.1 液相色谱条件 a) 色谱柱：ODSCig色谱柱，250mmX4.6mm(i.d.），5μm，或性能相当者； b) 柱温：25℃； c) 检测波长：270nm； (P 进样量：10μL； 流速：l.0mL/min; f) 流动相：流动相及液相色谱梯度洗脱条件见表2。 2 GB/T30087—2013 表2色谱梯度洗脱条件 时间 乙腈+甲醇（4.8) 20mmol/L乙酸铵（4.9) min % % 45 55 18 45 55 20 100 0 25 100 0 25.1 45 55 6.2.2标准工作曲线绘制 分别移取10μL浓度为0.200μg/mL、1.00μg/mL、2.50μg/mL、5.00μg/mL、10.0μg/mL、 20.0μg/mL的标准工作溶液（4.12），按液相色谱条件（6.2.1)进行测定，以色谱峰的峰面积为纵坐标，对 应的溶液浓度为横坐标作图，绘制标准工作曲线。 标准样品色谱图参见图A.1。 6.2.3定量分析 用微量注射器准确吸取10μL处理后的样品溶液（6.1)注人液相色谱仪，按液相色谱条件（6.2.1)进 行测定，记录色谱峰的保留时间和峰面积，由色谱峰的峰面积可从标准工作曲线上求出相应的色谱峰浓 度。样品溶液中被测物的响应值应在仪器测定的线性范围之内，含量高的样品可取适量样品溶液用含 2%氨水的甲醇溶液（4.7)稀释后进行测定。 6.2.4定性确证 色谱图中，该物质的紫外吸收图谱与标准样品的紫外吸收图谱相一致，则样品中可能存在保泰松。阳性 样品需用液相色谱/质谱进行确证试验（参见附录B）。 6.3空白试验 SIC 除不称取样品外，均按上述测定条件和步骤进行。 6.4平行试验 按以上步骤，对同一样品进行平行试验测定。 7结果计算 样品中保泰松的含量按式（1)计算： (1) m×1000 式中： X—样品中保泰松的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； 样品中保泰松面积对应的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL)； 3