ICS 67.050 X 04 GP 中华人民共和国国家标准 GB/T22947—2008 蜂王浆中十八种磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of 18 sulfonamides residues in royal jelly- LC-MS-MS method 2008-12-31发布 2009-05-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 22947—2008 前言 本标准的附录A、附录B为资料性附录。 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局 本标准主要起草人：贾光群、曹彦忠、张进杰、王占英、石玉秋、姚智慧、庞国芳 GB/T22947—2008 蜂王浆中十八种磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 1范围 本标准规定了蜂王浆中十八种磺胺类药物（见表2）残留量液相色谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于蜂王浆中十八种磺胺类药物残留量的测定。 本标准的方法检出限均为5.0ug/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义 (GB/T6379.12004,ISO5725-1:1994,IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法（GB/T6379.2—2004,ISO5725-2：1994,IDT) GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008,ISO3696：1987,MOD） 3原理 蜂王浆中磺胺类药物残留用去离子水提取，三氯乙酸沉淀蛋白，离心后，上清液经OasisMCX离子 交换柱"或相当的固相萃取柱净化，用氨水-甲醇溶液（1十19）洗脱并蒸干，残渣用乙腈-0.01mol/L乙 酸铵溶液溶解，过0.2μm滤膜后，样品溶液供液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。 4试剂和材料 4.1水:GB/T 6682,一级。 4.2甲醇：色谱纯。 4.3乙腈：色谱纯。 4.42 乙酸铵：优级纯。 4.5 三氯乙酸：优级纯。 甲酸：优级纯。 4. 6 4.7 氨水：分析纯。 4.80.01mol/L乙酸铵溶液：称取0.77g乙酸铵（4.4)溶于1000mL水中。 4.92%甲酸溶液：吸取2mL甲酸（4.6），用水稀释至100mL。 4.1050%三氯乙酸溶液：称取20g三氯乙酸（4.5）溶于20mL水中。 4.11氨水-甲醇溶液（1+19）：吸取5mL氨水（4.7)与95mL甲醇（4.2)混合均匀。 4.12乙腈-0.01mol/L乙酸铵溶液（3+22）：量取12mL乙睛（4.3）与88mL乙酸铵溶液（4.8）混合 均匀。 OasisMCX离子交换柱是Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表 1） 示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 1 GB/T22947—2008 4.13十八种磺胺类药物标准物质：磺胺嘧啶（CAS：68-35-9）、磺胺噻唑（CAS：72-14-0）、磺胺吡啶 （CAS：144-83-2）、磺胺甲基嘧啶（CAS：127-79-7）、磺胺间甲氧嘧啶（CAS：1220-83-3）、磺胺甲噻二唑 （CAS：144-82-1）、磺胺二甲嘧啶（CAS：57-68-1）、磺胺甲氧哒嗪（CAS：80-35-3）、磺胺对甲氧嘧啶 （CAS:2447-57-6）、磺胺二甲异唑（CAS：127-69-5）、磺胺苯酰（CAS：127-71-9）、磺胺氯吡嗪（CAS： 102-65-8）、磺胺苯吡唑（CAS：526-08-9）、磺胺间二甲氧嘧啶（CAS：1037-50-9）、磺胺喹嘛（CAS：59- 40-5）。纯度≥99%。 4.140.1mg/mL标准储备溶液：准确称取适量的每种磺胺标准物质（4.13），用甲醇分别配成 0.1mg/mL的标准储备溶液。该溶液在4℃保存 4.155.0μg/mL磺胺混合标准工作溶液：分别吸取各标准储备溶液（4.14)0.5mL移至10mL容量 瓶中，用甲醇稀释成5.0μg/mL混合标准工作溶液。该溶液在4℃保存。 4.16磺胺内标物质：磺胺甲基异唑-D4、磺胺嘧啶-D4、磺胺噻唑-D4。纯度≥99%。 4.170.1mg/mL磺胺甲基异唑-D4、磺胺嘧啶-D4、磺胺噻唑-D4内标储备溶液：称取适量磺胺甲基 异嗯唑-D4、磺胺嘧啶-D4、磺胺噻唑-D4标准物质（4.16），用甲醇分别配成0.1mg/mL的内标储备溶 液。该溶液在4℃保存。 4.18混合内标工作溶液：分别吸取磺胺甲基异唑-D4、磺胺嘧啶-D4、磺胺噻唑-D4储备溶液（4.17） 各0.5mL移至10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。该溶液在4℃保存。 4.19基质标准工作溶液：吸取不同体积标准工作溶液（4.15）和20L混合内标工作溶液（4.18），用空 白样品提取液配成5.0ng/mlL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL、100.0ng/mL不同浓度的基质 标准工作溶液。当天配制。 4.20OasisMCX柱或相当者：150mg，6mL。用前依次用5mL甲醇（4.2）和10mL水处理。保持柱 体湿润。 4.21滤膜：0.2μm。 5仪器 5.1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 5.2 分析天平：感量0.1mg和0.01g。 5.3 具塞的聚丙烯试管：50mL。 5.4振荡器。 5.5 液体混匀器。 5.6 6固相萃取装置。 5.7 玻璃贮液器：50mL。 5.8 氮气浓缩仪。 5.9浓缩管：10mL。 6试样制备与保存 6.1试样的制备 对于冷冻的实验室样品，待其解冻后将其搅拌均匀。分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样 品瓶中，密封，并做上标记。 6.2试样的保存 将试样于一18℃冷冻保存。 2 GB/T 22947—2008 7测定步骤 7.1提取 称取2g试样，精确至0.01g。置于50mL具塞的聚丙烯试管（5.3)中，加人20μL内标工作溶液 （4.18），然后加人20mL水，于液体混匀器（5.5）上快速混匀1min，再置于振荡器（5.4）上振荡提取 10min，加人0.5ml三氯乙酸溶液（4.10），快速摇动30s，以3000r/min离心5min，移取上清液至三 角瓶中，再向残渣中加人15mL水，重复上述步骤，合并上清液，待净化。 7.2净化 将塞有玻璃棉的玻璃贮液器（5.7）连到OasisMCX柱（4.20）上，把上清液（7.1)倒人玻璃贮液器 中，调节流速小于3mL/min，待样液完全流出后，依次用5mL甲酸溶液（4.9）和5ml甲醇（4.2）洗柱， 弃去全部流出液。最后用5mL氨水-甲醇溶液（4.11）洗脱，收集洗脱液于10mL浓缩管（5.9）中。用 氮气浓缩仪（5.8)于50℃吹干。准确加人1.0mL乙睛-0.01mol/L乙酸铵溶液（4.12)溶解残渣，样液 过0.2um滤膜后，供液相色谱-串联质谱仪测定。 按上述操作步骤，制备用于配制系列基质标准工作溶液的空白样品提取液 7.3测定条件 7. 3. 1 液相色谱参考条件 a) 色谱柱：AtlantisCis，3μm，150mmX2.1mm（内径）或相当者； b) 流动相：A：乙睛，B：0.1%甲酸水溶液，C：甲醇。梯度洗脱条件见表1； c) 流速：0.2mL/min； d) 柱温：35℃； e) 进样量：20μL。 表1流动相梯度表 B/ % 时间/min A/% C/% 10.0 0.00 80.0 10.0 3.00 20.0 70.0 10.0 8.00 35.0 55.0 10.0 12.00 70.0 20.0 10.0 12. 01 10.0 80.0 10. 0 17. 00 10.0 80.0 10.0 7. 3. 2 质谱参考条件 a) 离子源：电喷雾离子源； b) 扫描方式：正离子扫描； c) 检测方式：多反应监测； d) 电喷雾电压：5500V； e) 雾化气压力：0.076MPa； f) 气气压力：0.069MPa； g) 辅助气流速：6L/min； h) 离子源温度：350℃； i) 定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压见表2。 3