ICS 67.050 X 04 GF 中华人民共和国国家标准 GB/T22941—2008 蜂蜜中林可霉素、红霉素、螺旋霉素、 替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、 吉他霉素、竹桃霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of lincomycin, erythromycin, spiramycin, tilmicosin, tylosin, josamycin, kitasamycin,oleandomycin residues in honey LC-MS-MS method 2008-12-31发布 2009-05-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 22941—2008 前言 本标准的附录A、附录B为资料性附录。 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局 本标准主要起草人：曹彦忠、张艳梅、贾光群、张进杰、石玉秋、庞国芳。 GB/T22941—2008 蜂蜜中林可霉素、红霉素、螺旋霉素 替米考星、泰乐菌素、交沙霉素 吉他霉素、竹桃霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 1范围 本标准规定了蜂蜜中林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃 霉素残留量液相色谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于蜂蜜中林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃 霉素残留量的测定。 本标准的方法检出限均为2.0μg/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义 (GB/T6379.12004，ISO5725-1:1994,IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法（GB/T6379.2—2004,ISO5725-2:1994,IDT） GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008，ISO3696：1987，MOD 3原理 蜂蜜中残留的林可霉素、红霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、交沙霉素、吉他霉素、竹桃霉素用 三羟甲基氨基甲烷（Tris)缓冲溶液（pH=9)提取，过滤后，经OasisHILB固相萃取柱"或相当的固相萃 取柱净化，用甲醇洗脱并蒸干，残渣用乙腈-0.01mol/L乙酸铵溶液溶解，过0.2μm滤膜后，样品溶液 供液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。 4试剂和材料 4.1水:GB/T6682，一级 4.2甲醇：色谱纯。 4.3乙腈：色谱纯。 4.4三羟甲基氨基甲烷（Tris)：优级纯。 4.5氯化钙（CaCl·2H,O)：优级纯。 4. 6 乙酸铵：优级纯。 1）OasisHLB固相萃取柱是Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表 示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 1 GB/T22941—2008 4.7盐酸：优级纯。 4.8淋洗液：甲醇溶液（2+3）。量取40mL甲醇（4.2)与60mL水混合。 4.90.01mol/L乙酸铵溶液：称取0.77g乙酸铵（4.6)溶于1000mL水中。 氯化钙（4.5），放入1000mL烧杯中，加人800mL水溶解，用盐酸（4.7）调至pH值为9.0，再用水定容 至1000mL （4.9)混合均匀。 4.12标准物质：林可霉素（CAS：7179-49-9）、红霉素（CAS：59319-72-1）、螺旋霉素（CAS：8025-81-8）、 替米考星（CAS：108050-54-0）、泰乐菌素（CAS：74610-55-2）、交沙霉素（CAS：16846-24-5）、吉他霉素 （CAS：1392-21-8）、竹桃霉素（CAS：7060-74-4），纯度≥99%。 标准储备溶液。该溶液在4C保存。 醇稀释至刻度。该溶液在4℃保存。 4.15内标物质：罗红霉素（CAS80214-83-1）、克林霉素（CAS：21462-39-5），纯度≥99%。 4.160.1mg/mL罗红霉素、克林霉素内标储备溶液：准确称取适量的罗红霉素、克林霉素标准物质 （4.15），用甲醇配成0.1mg/mL的内标储备溶液。该溶液在4℃保存。 4.171.0μg/mL混合内标工作溶液：分别吸取罗红霉素和克林霉素内标储备溶液（4.16）0.1mL移 至10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。该溶液在4℃保存。 4.18基质标准工作溶液：吸取不同体积混合标准工作溶液（4.14）和20uL混合内标工作溶液（4.17）， 用空白样品提取液配成2.0ng/mL.5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL不同浓度的基 质标准工作溶液。当天配制。 4.19OasisHLB固相萃取柱或相当者：200mg，6mL。使用前依次用5mL甲醇（4.2）和10mL水活 化，保持柱体湿润。 4.20滤膜：0.2μm。 5仪器 5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源 5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。 5.3氮气浓缩仪。 5.4液体混匀器。 5.5贮液器：50mL。 5.6真空泵：最大负压80kPa。 5.7 固相萃取装置。 5.8吹干管：10mL。 6试样的制备与保存 6.1试样的制备 中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温。分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶 2 GB/T 22941—2008 中，密封，并做上标记。 6.2试样保存 将试样于常温下保存。 7测定步骤 7.1提取 称取2g试样，精确至0.01g。置于150mL三角瓶中，加人20μL混合内标工作溶液（4.17），加人 25mLTris缓冲溶液（4.10），于液体混匀器（5.4)上快速混匀1min，使试样完全溶解。 7.2净化 将塞有玻璃棉的玻璃贮液器（5.5）连到OasisHLB固相萃取柱（4.19）上，把样液倒人玻璃贮液器 中，调节流速小于3mL/min，待样液完全流出后，依次用5mL水和5mL淋洗液（4.8）洗柱，弃去全部 流出液。减压抽干20min，然后用5mL甲醇（4.2）洗脱，收集洗脱液于10mL吹干管（5.8）中。用氮气 浓缩仪（5.3）于50℃吹干。准确加人1.0mL定容液（4.11)溶解残渣，过0.2μm滤膜后，供液相色谱 串联质谱仪测定。 按上述操作步骤，制备用于配制系列基质标准工作溶液的样品空白提取液 7.3测定条件 7.3. 1 液相色谱参考条件 a) 色谱柱：AtlantisCig，3μm，150mmX2.1mm（内径）或相当者； b) 流速:0.2 mL/min; c) 柱温：30℃； d) 进样量：20μL； e 流动相：A：乙腈，B：0.1%甲酸溶液，C：甲醇。梯度洗脱条件见表1。 表1梯度洗脱条件 时间/min A/% B/ % C/% 0. 00 90.0 5.0 5. 0 5.00 5.0 90.0 5.0 9.00 5.0 90.0 5. 0 9.10 90.0 5.0元 5.0 17.0 90.0 5.0 5.0 7. 3. 2 质谱参考条件 a) 离子源：电喷雾离子源； b) 扫描方式：正离子扫描； 检测方式：多反应监测； c) d) 电喷雾电压：5500V； e) 雾化气压力：0.069MPa； f) 气帘气压力：0.069MPa； g) 辅助气流速：7L/min； h) 离子源温度：450℃； i) 定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压见表2。 3