ICS 67.050 X 04 GE 中华人民共和国国家标准 GB/T 22984—2008 牛奶和奶粉中卡巴氧和喹乙醇代谢物 残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of the residues of metabolites of carbadox and olaquindox in milk and milk powder- LC-MS-MS method 2008-12-31发布 2009-05-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T22984—2008 前言 本标准的附录A、附录B为资料性附录。 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国深圳出入境检验检 疫局。 本标准主要起草人：林黎、谢丽琪、欧阳姗、梁宏、叶刚、廖菁菁、庞国芳 GB/T22984—2008 牛奶和奶粉中卡巴氧和喹乙醇代谢物 残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 1范围 本标准规定了牛奶和奶粉中卡巴氧代谢物喹啉-2-羧酸（quinoxaline-2-carboxylicacid）和喹乙醇 代谢物3-甲基喹啉-2-羧酸（3-methylquinoxaline-2-carboxylicacid)残留量的液相色谱-串联质谱测定 方法。 本标准适用于牛奶和奶粉中卡巴氧代谢物喹嗯啉-2-羧酸（quinoxaline-2-carboxylicacid）和喹乙醇 代谢物3-甲基喹嗯-2-羧酸（3-methylquinoxaline-2-carboxylicacid）残留量的测定。 为4. 0 μg/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义 (GB/T6379.1—2004,ISO5725-1:1994,IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法（GB/T6379.22004，ISO5725-2：1994，IDT） GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008，ISO3696：1987.MOD） 3原理 用甲酸溶液消化试样，使牛奶和奶粉中天然存在的酶失活，然后加人蛋白酶水解，盐酸酸化，离心过 滤后，固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。 4试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1甲醇：色谱纯。 4.2甲酸：色谱纯。 4.3乙酸钠。 4.4 乙酸乙酯。 4.52%甲酸-乙酸乙酯溶液：向400mL乙酸乙酯中加人10mL甲酸，用乙酸乙酯定容至500mL。 4.60.6%甲酸溶液：量取6.0mL甲酸，用水溶解、定容至1L。 4.70.1%甲酸溶液：量取1.0mL甲酸，用水溶解、定容至1L。 4.8甲酸-甲醇溶液（19+1)：用190mL甲酸溶液（4.2)与10mL甲醇（4.1)混合。 4.90.1mol/L盐酸溶液：量取8.3mL浓盐酸，用水溶解、定容至1L。 4.100.3mol/L盐酸溶液：量取25mL浓盐酸，用水溶解、定容至1L。 GB/T22984—2008 4.11Protease蛋白酶：SigmaP5147或相当者，一18℃以下保存。 4.120.01g/mL蛋白酶水溶液：称取1.00gProtease蛋白酶（4.11)，用水溶解、定容至100mL，4℃ 保存。 4.1310%乙酸溶液：量取100mL乙酸，用水溶解、定容至1L。 4.140.05mol/L乙酸钠溶液：称取6.8g乙酸钠用800mL水溶解，再滴加10%乙酸溶液以调节溶液 pH=7,用水定容至 1 L。 4.15乙酸钠-甲醇溶液（19+1)：用190mL乙酸钠溶液（4.14）与10mL甲醇（4.1)混合。 4.16甲醇-水溶液（1+4）。 4.17Tris碱：SigmaT1503或相当者。 4.181.0mol/LTris溶液：称取121gTris碱（4.17)，用水溶解、定容至1L，4℃保存 4.19喹啉-2-羧酸、3-甲基喹啉-2-羧酸、喹啉-2-羧酸-d4标准物质：纯度≥99%。 4.20标准储备液：100mg/L。准确称取适量标准物质，分别用甲醇溶解定容，配成100mg/L的标准 储备液，在一18℃以下保存。 4.21基质混合标准工作溶液：根据灵敏度和使用需要，用空白样品提取液配成不同浓度（ug/L）的混 合标准工作溶液，在4℃保存。 4.22内标工作溶液：准确称取适量喹嗯啉-2-羧酸-d4标准物质，用甲醇溶解定容，配成100μg/L的标 准工作溶液，在4℃保存。 4.23OasisMAX固相萃取柱或相当者：60mg，3mL。用前分别用3mL甲醇和3mL水活化，保持 柱体湿润。 4.24滤膜：0.2μm。 5仪器和设备 5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 5.2固相萃取真空装置。 5.3吹氮浓缩仪。 5.4旋涡振荡器。 5.5分析天平：感量0.1mg和0.01g。 5.6真空泵。 5.71 低温离心机：可制冷到4℃，转速大于5000r/min。 5.8移液器量程：10μL~100μL和100μL～1000μL。 5.9聚丙烯离心管：15mL和50mL，具塞。 5.10pH计：精度士0.02pH单位。 6试样制备与保存 6.1试样的制备 取不少于500g有代表性的牛奶或奶粉，充分混匀，分为两份，置于样品瓶中，密封，并作上标记 6.2试样的保存 牛奶置于4℃冰柜中避光保存，奶粉则于室温下置于干燥器保存。 SAC 1）OasisMAX固相萃取柱是Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表 示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 2 GB/T22984—2008 7测定步骤 7.1提取 7.1.1牛奶 准确称取5g牛奶样品（精确到0.01g），置于50mL聚丙烯离心管中，加入一定量的内标溶液 （4.22），使其浓度为2.0ng/g，再加人10mL0.6%甲酸溶液（4.6），混勾后，置于（47士3）℃振荡水浴 中振摇1h；然后先加人3mL1.0mol/LTris溶液（4.18）,再加人0.3mL蛋白酶水溶液（4.12），充分 混匀后，置于（47土3）℃振荡水浴中酶解16h18h。加人20mL0.3mol/L盐酸（4.10），振荡5min， 在10℃以5000r/min离心15min，上清液过滤。 7.1.2奶粉 取12.5g奶粉于烧杯中，加适量35℃～50℃水将其溶解，待冷却至室温后，加水至总质量为 100g，充分混匀后准确称取5g样品（精确到0.01g），置于50mL聚丙烯离心管中，按7.1.1步骤进行 处理。 7.2净化 将7.1所得溶液以约1mL/min的流速全部通过OasisMAX固相萃取柱（4.23），分别用15mL乙 酸钠-甲醇溶液（4.15）淋洗固相萃取柱，真空抽干15min。再用5mL甲醇、3mL水、5mL0.1mol/L 盐酸（4.9）和3mL甲醇-水溶液（4.16）分别淋洗，真空抽干15min，然后用2mL乙酸乙酯淋洗固相萃 取柱，弃去全部淋出液，最后用3mL甲酸-乙酸乙酯溶液（4.5）洗脱喹啉-2-羧酸和3-甲基喹啉-2-羧 溶解残渣，过0.2μm滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定 7.3空白基质溶液的制备 称取阴性样品5g（精确到0.01g），按7.1和7.2步骤操作。 7.4测定条件 7.4.1液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下： 色谱柱：ODS,3μm，100mmX2.1mm（内径）或相当者； 流动相：甲醇、乙腈以及0.1%甲酸溶液（时间梯度见表1)； 表1流动相时间梯度 时间/min 甲醇/% 乙腈/% 0.1%甲酸/% 0. 0 13 7 80 10.0 45 15 40 10.1 64 16 20 13.1 13 7 80 20.0 13 7 80 流速：0.2mL/min; c) d) 柱温：30℃； 进样量：30μL。 7. 4.2 质谱参考条件 质谱参考条件如下： a) 离子源：电喷雾离子源； b) 扫描方式：正离子扫描； c) 检测方式：多反应检测； 3