ICS 65.160 X 87 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 23228—2008 卷烟 主流烟气总粒相物中 烟草特有N-亚硝胺的测定 气相色谱-热能分析联用法 Cigarette—Determination of tobacco specific N-Nitrosamines in total particulate matter of mainstream cigarette smoke- GC-TEA method 2009-06-01实施 2008-12-31发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T23228—2008 前言 本标准的附录A、附录B为资料性附录。 本标准由国家烟草专卖局提出。 本标准由全国烟草标准化技术委员会（SAC/TC144）归口。 本标准起草单位：中国烟草总公司郑州烟草研究院、上海烟草（集团）公司。 本标准主要起草人：谢复炜、金永明、赵明月、王昇、刘克建、吴鸣。 GB/T23228—2008 卷烟主流烟气总粒相物中 烟草特有N-亚硝胺的测定 气相色谱-热能分析联用法 1范围 硝基假木贼碱（NAB)和4-（甲基亚硝胺基）-1-（3-吡啶基）-1-丁酮（NNK)四种烟草特有亚硝胺的测定 方法。 本标准适用于卷烟烟气总粒相物中以上四种烟草特有亚硝胺的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T5606.1、卷烟第1部分：抽样 GB/T19609卷烟用常规分析用吸烟机测定总粒相物和焦油（GB/T19609—2004，ISO4387： 2000,MOD) SNG 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3. 1 烟草特有亚硝胺 tobacco specific nitrosamines (TSNAs) 仅在烟草及烟草制品中存在的N-亚硝胺 4原理 用玻璃纤维滤片捕集卷烟主流烟气中的总粒相物，用二氯甲烷萃取粒相物中的TSNAs，浓缩萃取 物并采用碱性氧化铝层析柱进行纯化。通过气相色谱-热能分析联用仪（GC-TEA）检测萃取物中亚硝 胺的浓度，对主流烟气总粒相物中TSNAs进行定量分析。 5试剂与材料 除特别要求以外，均应使用分析纯级试剂。水应为蒸馏水或同等纯度的水。 5.1二氯甲烷，色谱纯（或分析纯经重蒸后使用）。 5.2甲醇，色谱纯（或分析纯经重蒸后使用）。 5.3无水硫酸钠。 5.4碱性氧化铝，200目～300目。 5.5N-戊基-（3-甲基吡啶基）亚硝胺、NNN、NAT、NAB、NNK，纯度应大于97%。 5.6内标溶液 5.6.1内标储备液 准确称量10mgN-戊基-（3-甲基吡啶基）亚硝胺，加人约50mL二氯甲烷（5.1）完全溶解后，转移 1 GB/T23228—2008 至100mL的棕色容量瓶中，用二氯甲烷（5.1)定容至刻度。该内标储备液在一20℃冰箱内存放，有效 期为6个月。 5.6.2一级内标溶液 准确移取2mL内标储备液（5.6.1）至50mL棕色容量瓶中，用二氯甲烷（5.1）定容至刻度。该一 级内标溶液在一20℃冰箱内存放，有效期为6个月。 5.6.3二级内标溶液 准确移取10mL一级内标溶液（5.6.2）至100mL棕色容量瓶中，用二氯甲烷（5.1)定容至刻度。 该二级内标溶液在一20℃冰箱内存放，有效期为3个月。5 5.7TSNAs标准溶液 5.7.1标准储备液 分别准确称量10mgNNN、NAT、NAB和NNK，加人约5mL二氯甲烷（5.1)完全溶解后，转移至 10mL的棕色容量瓶中，用二氯甲烷（5.1)定容至刻度。该标准储备液在一20C冰箱内存放，有效期为 6个月。 5.7.2一级标准溶液 准确移取1mL标准储备液（5.7.1）至100mL棕色容量瓶中，用二氯甲烷（5.1)定容至刻度。该一 级标准溶液在一20℃冰箱内存放，有效期为6个月。 5.7.3二级标准溶液 准确移取1mL一级标准溶液（5.7.2）至10mL棕色容量瓶中，用二氯甲烷（5.1)定容至刻度。该 二级标准溶液在一20℃冰箱内存放，有效期为3个月。 5.8TSNAs校准溶液：分别准确移取0.5mL、1mL、2mL、5mL二级标准溶液（5.7.3）和1mL、2ml 一级标准溶液（5.7.2)至10mL棕色容量瓶中，准确加入1mL一级内标溶液（5.6.2），最后用二氯甲烷 (5.1)定容至刻度，此六个标准溶液为系列标准校准溶液。该TSNAs校准溶液应在使用前配制。 注：烟草特有亚硝胺是强烈致癌物质。所有前处理操作应在通风橱内进行，实验人员应佩带防护手套、面具以保证 安全。实验废液收集后应统一处理。 6仪器设备 常用实验仪器以及下述各项。 6.1分析天平，精确至0.1mg。 6.2气相色谱-热能分析联用仪。 6.3超声波发生器。 6.4旋转蒸发仪。 6.5包 色谱柱，弹性毛细管柱30mX0.53mmX1μm，建议固定液：HP-50+十。 6.6保护柱，弹性石英毛细管柱1mX0.53mm，应经脱活处理。 6.7玻璃层析柱，具塞，内径为20mm，长度为300mm。 7抽样 按照GB/T5606.1的规定抽取实验室样品。 8分析步骤 8.1卷烟的抽吸 按照GB/T19609的规定收集20支卷烟的粒相物 8.2测定次数 每个样品应平行测定两次。 2 GB/T23228—2008 8.3样品分析 8.3.1样品萃取 将捕集有主流烟气粒相物的滤片放人250mL锥形瓶中，置于超声波发生器（6.3)内，用二氯甲烷 (5.1)分三次超声波萃取，每次10min，第一次使用100mL二氯甲烷，其余两次各使用80mL二氯甲 烷。将所有萃取液经无水硫酸钠（5.3)过滤，转移至500mL磨口圆底烧瓶中。 8.3.2萃取液浓缩 将盛有萃取液的圆底烧瓶连接旋转蒸发仪（6.4），通高纯氮气旋转蒸发（40℃水浴），浓缩至5mL。 8.3.3样品净化 8.3.3.1层析柱的准备 碱性氧化铝（5.4)在110℃下活化2h。玻璃层析柱（6.7)应保持洁净干燥，先加入30mL二氯甲 烷（5.1），再用湿法将15g碱性氧化铝（5.4)加到层析柱中，充分搅拌并赶走所有气泡。用50mL二氯 甲烷淋洗层析柱。 8.3.3.2层析 将浓缩后样品（8.3.2）一次性加入按照8.3.3.1准备的层析柱中，并用二氯甲烷（5.1)分三次洗涤 烧瓶壁，每次5mL。用30mL二氯甲烷淋洗层析柱，流速应控制在约2mL/min，不收集洗脱液。用 100mL8%甲醇-二氯甲烷（体积分数）溶液淋洗层析柱，收集此部分洗脱液。 8.3.4洗脱液浓缩 在洗脱液中加入1mL二级内标溶液（5.6.3）后，通高纯氮气浓缩至30mL，转移至50mL梨形烧 瓶中，浓缩至约1 mL后，移至2mL色谱分析瓶中待分析。 8.4分析 按照制造商操作手册运行气相色谱-热能分析联用仪。以下分析条件可供参考，采用其他条件应验 证其适用性。 一程序升温：初始温度150℃，保持2min；以3℃/min速率升至230℃，20℃/min速率升至 260℃，保持20min； 进样口温度：230℃； 一载气：氮气，恒流10mL/min； 一进样量2μL，不分流，不分流时间1min，吹扫流量50mL/min； 一热裂解温度：550C； 接口温度：250℃。 典型卷烟样品色谱图参见图A.1。 8.5测定 用气相色谱-热能分析联用仪测定一系列TSNAs校准溶液（5.8），用TSNAs与内标峰面积的比值 作为纵坐标，TSNAs的浓度作为横坐标，分别建立四种TSNAs成分的校正曲线。对校正数据进行线 性回归，R²应不小于0.99。测定样品，根据样品中的峰面积计算每一个卷烟烟气样品中四种TSNAs 的浓度（ng/mL）。 9结果的计算与表述 由式（1）计算出样品主流烟气中四种TSNAs的传输量，以每支卷烟主流烟气TSNAs传输量来表 示，单位为ng。取两个平行测定的算术平均值作为样品的测试结果，结果精确到0.01ng。 X=CXV (1) n 式中： X—每支卷烟主流烟气TSNAs的传输量，单位为纳克/每支（ng/支）； 3