ICS 65. 120 B 46 GP 中华人民共和国国家标准 GB/T 23877—2009 饲料酸化剂中柠檬酸、富马酸和 乳酸的测定 高效液相色谱法 Determination of citric acid,fumaric acid and lactic acid in feed acidifier- High performance liquid chromatography 2009-05-26发布 2009-10-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T23877—2009 前言 本标准的附录A为规范性附录，附录B为资料性附录。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）提出并归口。 本标准起草单位：上海市饲料质量监督检验站、上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研 究所。 本标准主要起草人：赵志辉、黄志英、顾赛红、杨海锋、林淼、白冰、雷萍、凤懋熙。 GB/T23877—2009 饲料酸化剂中柠檬酸、富马酸和 乳酸的测定高效液相色谱法 1范围 本标准适用于饲料酸化剂中柠檬酸、富马酸和乳酸含量的测定 本方法的定量限为：柠檬酸800mg/kg、富马酸8.0mg/kg、乳酸800mg/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T601化学试剂标准滴定溶液的制备 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14699.1饲料采样 3原理 试样中柠檬酸、富马酸和乳酸加水超声提取后，稀释至适当的浓度，用高效液相色谱仪进行测定，外 标法计算柠檬酸、富马酸和乳酸的含量。 4试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682二级规定的用水。 4.1乙腈：色谱纯。 4.2磷酸：色谱纯。 4.30.1%磷酸溶液：准确吸取1.00mL磷酸（4.2）,用符合GB/T6682规定的一级用水溶解并定容至 1 000 mL。 4.4柠檬酸标准品：纯度≥99.5%。 4.5富马酸标准品：纯度≥99.5%。 4.6柠檬酸标准储备液：准确称取柠檬酸标准品0.5025g于50mL容量瓶中，用水溶解并定容至刻 度。此溶液浓度为10.0mg/mL，4℃条件下储藏，保存期3个月。 4.7富马酸标准储备液：准确称取0.1000g富马酸标准品于100mL容量瓶中，用水溶解并定容至刻 度。此溶液浓度为1.0mg/mL，4℃条件下储藏，保存期3个月。 4.8乳酸标准储备液：制备和标定方法见附录A。 乳酸标准储备液（4.8）于50mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。4℃条件下储藏，保存期1个月。 4.10混合标准工作液：准确吸取0.10mL、0.25mL0.50mL、1.00mL、2.50mL、5.00mL、 10.00mL混合标准储备液（4.9）于10.0mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。此为混合标准工作液， 现配现用。 1 GB/T23877—2009 5仪器和设备 5.1实验室常用仪器设备。 5.2分析天平：感量为0.0001g。 5.3超声波清洗器 5.4德 微孔滤膜：孔径0.45μum。 5.5高效液相色谱仪（配有紫外检测器或二极管阵列检测器）。 6试样的制备 按GB/T14699.1规定，取有代表性的样品1kg，四分法缩减取200g，装人磨口瓶中备用。 7分析步骤 7.1试样溶液制备 称取试样1g~5g（精确至0.0001g），置于100mL容量瓶中，加60mL水，在50℃水浴中超声提 取20min，冷却至室温，用水定容至刻度，摇匀过滤。取滤液稀释，使最后稀释液中各种有机酸的浓度 均落在4.10的工作曲线之内。取部分稀释液过0.45μm滤膜，滤液作为试样溶液。 7.2高效液相色谱条件 色谱柱：Cs柱，长250mm，内径4.6mm，粒度5um（极性色谱柱）。 柱温：35℃。 流动相：乙睛十磷酸溶液（4.3）2.5十97.5（体积比）。 流速:1.0 mL/min。 检测波长：210nm。 进样量：20μL。 7.3液相色谱测定 分别取混合标准工作液（4.10）和试样溶液（7.1），按7.2列出的条件进行液相色谱分析测定。以混 合标准工作液作多点校准，并用色谱峰面积积分值定量。测定中应调整试样溶液的浓度，使柠檬酸、富 马酸和乳酸的积分值分别落在标准曲线的相应范围内。 8结果计算与表述 试样中柠檬酸、富马酸和乳酸的含量X，以质量分数表示，按式（1）计算： cXVXn X= X 100% ·(1) mX1000000 式中： V试样液总体积，单位为毫升（mL）； n——稀释倍数； m一—试样的质量，单位为克（g）。 测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留3位有效数字。 9重复性 在重复性条件下，完成两个平行测定的结果的相对偏差不大于5%。 2 GB/T23877—2009 附录A （规范性附录） 乳酸标准储备溶液的制备和标定 A.1试剂和材料 A. 1. 1 乳酸：纯度约为90%。 A.1.20.1mol/L氢氧化钠标准滴定溶液：按GB/T601配制和标定。 A.1.31%酚酞指示剂溶液：1g酚酞溶于60mL95%乙醇中，用水稀释至100mL。 A.2 仪器和设备 A.2.1 电热套：500mL。 A.2.2圆底烧瓶：500mL A.2.3 球形冷凝管：100mL。 A.3制备和标定 称取乳酸约3.0g于500mL圆底烧瓶中，加270mL水，装上球形冷凝管，接通冷却水，加热回流 15h，冷却至室温。移取20mL溶液，加40mL~60mL水及0.2mL1%酚酞指示剂，用0.1mol/L氢 氧化钠标准滴定溶液滴定至微红色30s不褪色，记录消耗0.1mol/L氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数 (V）。乳酸标准储备液的浓度c，单位为微克每毫升（μg/mL），按式（A.1)计算： 5=5 ...(A.1) Vo 式中： c 氢氧化钠溶液的浓度，单位为摩尔每升（mol/L)； Vi一滴定乳酸溶液所消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，单位为毫升（mL）； V2—空白试验时所消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，单位为毫升（mL)； Vo 乳酸溶液的体积，单位为毫升（mL）； 90.08——乳酸的摩尔质量。 此标准储备液在4℃下可保存3个月。