ICS 11. 220 B 41 中华人民共和国国家标准 GB/T 17494—2009 代替GB/T17494—1998 马传染性贫血病间接ELISA诊断技术 Diagnostic techniques of indirect ELISA technique for equine infectious anemia disease 2009-04-23发布 2009-09-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T17494—2009 前言 本标准参照世界动物卫生组织（OIE)最新公布的《陆生动物诊断试验和疫苗手册》2004年版，并结 合我国现有动物卫生法规及农业部对马传贫的相关政策和措施修订，其技术内容与OIE所推荐的基本 一致。 本标准代替GB/T17494—1998《马传染性贫血病间接ELISA技术规程》。 本标准与GB/T17494—1998相比主要变化如下： “前言”部分作适当变动； 删除第2章的内容； 第6章“配制溶液”部分放置在附录内； 修订原标准中的所有语句和计量单位等错误用法。 本标准的附录A、附录B、附录C和附录D为规范性附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国动物防疫标准化技术委员会（SAC/TC181)归口。 本标准由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所负责起草。 本标准主要起草人：相文华、郭巍、赵立平、戴玉坤。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： GB/T 17494—1998。 I GB/T17494—2009 马传染性贫血病间接ELISA诊断技术 1范围 本标准规定了马传染性贫血病间接ELISA诊断技术的测定原理、材料准备、操作方法和结果判 定等。 本标准适用于检测马血清中的马传贫病毒抗体。可用于生产和经营马匹者对未注射马传贫疫苗马 匹的检疫、马传贫病马的定性，也可用于对注射马传贫疫苗马匹的免疫状态进行测定。 2测定原理 用制备的马传贫病毒抗原，包被聚苯乙烯微量板孔，使免疫反应在固相载体上进行。当被检血清中 有马传贫病毒抗体存在时，则与孔壁上的抗原形成抗原-抗体复合物，再与酶标记的抗体（抗马免疫球蛋 白）反应，最后通过测定酶作用底物催化后的产物，进行马传贫病毒抗体的定性、定量测定。 3材料准备 3.1器材 3.1.196孔平底微量反应板 3.1.2微量移液器。 3.1.3酶标测定仪。 3.1.4恒温箱。 3.1.5保湿盒等。 3.2试剂 3.2.1兔抗马IgG辣根过氧化物酶结合物（简称酶标抗体）为冻干品，见附录A。 3.2.2马传贫病毒抗原包被板见附录B。 3.2.3马传贫病毒标准阳性血清和标准阴性血清均为冻干品。 3.2.4磷酸盐缓冲液（0.02mol/L,pH7.2,PBS)配制方法见第C.1章。 3.2.5洗涤缓冲液（0.02mol/L，pH7.2,PBS-0.05%吐温-20)的配制方法见第C.2章。 3.2.6血清及酶标记抗体稀释液（0.02mol/L，pH7.2,PBS-0.05%吐温-20-0.1%白明胶-10%健康牛 血清的配制方法见第C.3章 3.2.7底物缓冲液（pH5.0磷酸盐-柠檬酸缓冲液，内含0.04%邻苯二胺及0.045%过氧化氢）的配制 方法见第C.4章。 3.2.8终止液（2mol/L，硫酸）的配制方法见第C.5章。 4操作方法 4.1冲洗包被板：向各孔注人洗涤缓冲液，浸泡3min，甩干，再注人洗涤缓冲液，重复3次。甩干孔内 残液，在滤纸上吸干。 4.2加被检血清及对照血清：将每份被检血清样品各取50μL加人到血清稀释板的各孔内，再将稀释 份血清加两个孔。每块反应板设阴性血清和阳性血清对照各两孔，每孔100uL。盖好包被板置37℃ 湿盒内1h，冲洗同4.1。 4.3加酶标记抗体：用酶标抗体稀释液将冻干酶标记抗体稀释至工作浓度，每孔加100μL，置37℃湿 1