ICS 11. 220 B 41 中华人民共和国国家标准 GB/T 17999.8—2008 代替GB/T17999.7—1999 SPF 鸡 微生物学监测 第8部分：SPF鸡 鸡白沙门氏菌检验 SPF chicken—Microbiological surveillance- Part 8: Examination of Salmonella pullorum for SPF chicken 2008-12-31发布 2009-05-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T17999.8—2008 前言 GB/T 17999《SPF鸡 微生物学监测》分为10个部分： 第1部分：SPF鸡 微生物学监测总则； 第2部分：SPF鸡 红细胞凝集抑制试验； 第3部分：SPF鸡 血清中和试验； 第4部分：SPF鸡 血清平板凝集试验； 第5部分：SPF鸡 琼脂扩散试验； 第6部分：SPF鸡 酶联免疫吸附试验； 第7部分：SPF鸡 胚敏感试验； 第8部分：SPF鸡 鸡白沙门氏菌检验； 第9部分：SPF鸡 试管凝集试验； 第10部分：SPF鸡 间接免疫荧光试验。 本部分为GB/T17999的第8部分。 本部分修订参照了NY/T556一2002《鸡传染性喉气管炎诊断技术》和OIE《陆生动物（哺乳动物 禽鸟和蜜蜂）诊断试验和疫苗手册》（第五版）中的有关规定 本部分代替GB/T17999.7—1999《SPF鸡鸡白痢沙门氏菌检验》。 本部分与GB/T17999.7—1999相比主要变化如下： 增加了活禽泄殖腔拭子检测样品； 增加了沙门氏菌菌体抗原血清学检测方法； 增加了附录A“革兰氏染色方法及生化试验结果判定”； 对试验操作程序进行了修订，将细菌镜检程序提前； 在范围中进一步明确了本部分使用的情况； 一删除了引用标准； 修订了试验操作程序。 本部分的附录A为规范性附录。 本部分由中华人民共和国农业部提出。 本部分由全国动物防疫标准化技术委员会（SAC/TC181）归口。 本部分起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中国动物卫生与流行病学中心、济南斯帕法 斯家禽有限公司。 本部分主要起草人：曲连东、姜骞、韩凌霞、邵卫星、朱果、单忠芳、刘家森、司昌德、郭东春、于海波、 孟庆文。 本部分所代替标准的历次版本发布情况为： -GB/T17999.7—1999。 1 GB/T17999.8—2008 SPF鸡微生物学蓝测 第8部分：SPF鸡鸡白沙门氏菌检验 1范围 GB/T17999的本部分规定了鸡白痢沙门氏菌检验的技术要求。 本部分适用于对SPF鸡进行鸡白痢沙门氏菌的分离和鉴定。 用血清平板凝集试验进行鸡白痫沙门氏菌的抗体检测，结果难以判断时，可采用本部分进行复检。 2原理 取待检样品（肠内容物、有关脏器匀浆、活禽泄殖腔拭子）接种于增菌培养基中进行增菌，然后将培 养物转移到选择、鉴别培养基上培养，挑选可疑菌落接种于营养琼脂培养基上，取培养物进行生化试验 与血清学试验，以确定鸡白沙门氏菌。 3试剂和器材 3.1材料 3.1.1培养基 营养肉汤培养基、DHL琼脂、SS琼脂、亚硫酸铋琼脂（BS)、三糖铁培养基（TSI)、营养琼脂、半固体 琼脂。 3.1.2生化反应试剂 糖发酵培养基、蛋白陈水、硝酸盐培养基、氧化酶试剂、氨基酸脱羧酶试验培养基、尿素培养基（结果 判定见附录A)。 3.1.3沙门氏菌诊断血清 A-F多价O血清、O9 因子血清、O12因子血清、H-a因子血清、H-d因子血清、H-g.m因子血清和 H-g. p 因子血清。 3.2器材 37℃恒温培养箱。 4操作步骤 4.1采样 无菌采取卵巢、肝、脾以及小肠和盲肠，活禽泄殖腔拭子。 4.2分离培养 将采集样品放入灭菌乳钵或均浆器中研磨成匀浆，加人少量营养肉汤稀释。取培养物或活禽泄殖 腔拭子分别在SS或BS和DHL琼脂平板培养基上划线接种，置（36土1）C培养24h～48h。在DHL 培养基上若出现黄褐色透明小菌落；或在SS琼脂平板上出现无色半透明圆形小菌落；或在BS琼脂平 板上出现黑色或黑绿色小菌落，则为可疑菌落。如果经24h～48h培养后未发现可疑菌落，再取增菌 培养物重复划线分离培养1次。 4.3病原鉴定 STG 4.3.1镜检 取可疑菌落，涂片作革兰氏染色，具体操作见附录A。镜检可见革兰氏阴性杆菌，大小为 1