ICS 67.050 x 04 GR 中华人民共和国国家标准 GB/T22940—2008 蜂蜜中氨苯砜残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of dapsone residues in honey- LC-MS-MS method 2008-12-31发布 2009-05-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T22940—2008 前言 本标准的附录A、附录B为资料性附录。 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局 本标准主要起草人：曹彦忠、杨志伟、贾光群、张进杰、石玉秋、庞国芳。 GB/T22940—2008 蜂蜜中氨苯砜残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 1范围 本标准规定了蜂蜜中氨苯矾残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于蜂蜜中氨苯砜残留量的测定。 本标准的方法检出限为2.0μg/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义 (GB/T6379.1—2004,ISO5725-1:1994,IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法（GB/T6379.22004，ISO5725-2：1994，IDT） GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008，ISO3696：1987,MOD） 3原理 净化，用甲醇洗脱并蒸干，残渣用流动相溶解，过0.2um滤膜后，样品溶液供液相色谱-串联质谱仪测 定，外标法定量。 4试剂和材料 4.1水：GB/T6682一级。 4.2甲醇：色谱纯。 4.3乙腈：色谱纯。 4.4 磷酸二氢钾（KH,PO·3H,O)：优级纯。 4.5磷酸氢二钾：优级纯。 4.6淋洗液：甲醇溶液（2+3）。量取40mL甲醇（4.2）和60mL水混合均匀。 4.70.05mol/L磷酸盐缓冲溶液：分别称取0.13g磷酸二氢钾（4.4）和5.48g磷酸氢二钾（4.5）,用 水溶解，调pH值为9.0，用水定容至1000mL。 4.8氨苯砜标准物质（CAS：80-08-0）：纯度≥99%。 4.90.5mg/mL标准储备溶液：准确称取适量的氨苯砜标准物质（4.8），用甲醇配成0.5mg/mL的标 准储备溶液，该溶液在4℃保存。 4.101.0μg/mL标准工作溶液：吸取0.1mL标准储备溶液（4.9）移至50mL容量瓶中，用甲醇定容 至刻度，该溶液在4℃保存。 1）OasisHLB固相萃取柱是Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表 示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 1 GB/T22940—2008 4.11基质标准工作溶液：用空白样品提取液配成2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、 50.0ng/mL不同浓度的基质标准工作溶液，该溶液需当天配制。 2OasisHLB固相萃取柱或相当者：500mg，6mL。用前依次用5mL甲醇和10mL水处理。保持 4.12 柱体湿润。 4.13滤膜：0.2μm。 5仪器 5.1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源 5.2 分析天平：感量0.1mg和0.01g。 5.3 液体混匀器。 5.4 固相萃取真空装置。 5.5 玻璃贮液器：50mL。 5. 6 真空泵：最大负压80kPa。 5.7 吹干管：15mL。 5. 8 氮气浓缩仪。 6试样制备与保存 6.1试样的制备 对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60℃的水浴 中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温。分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶 中，密封，并做上标记。 6.2试样的保存 将试样于常温下保存。 7测定步骤 7.1提取 称取2g试样，精确至0.01g。置于150mL三角瓶中，加人25mL磷酸盐缓冲溶液（4.7），于液体 混匀器（5.3）上快速混匀1min，使试样完全溶解。 7.2净化 将塞有玻璃棉的玻璃贮液器（5.5)连到OasisHLB或相当的固相萃取柱（4.12）上，把样液（7.1)倒 人玻璃贮液器中，调节流速小于3mL/min，待样液完全流出后，依次用5mL水和5mL淋洗液（4.6）洗 柱，弃去全部流出液。减压抽干30min，最后用5mL甲醇洗脱，洗脱液收集于15mL吹干管（5.7）中。 用氮气浓缩仪（5.8）于45℃吹干。准确加人1.0mL流动相溶解残渣，样液过0.2μm滤膜后，供液相 色谱-串联质谱仪测定。 7.3测定条件 7.3.1液相色谱参考条件 a) 色谱柱：AtlantisCi，3μm，150mm×2.1mm（内径）或相当者； b) 流动相：乙睛-0.1%甲酸溶液（7十13）； c) 流速：0.2mL/min； 柱温：30℃； e) 进样量：20μL。 7.3. 2 质谱参考条件 离子源：电喷雾离子源； 2 GB/T22940—2008 b) 扫描方式：正离子扫描； c) 检测方式：多反应监测； d) 电喷雾电压：5500V； e) 雾化气压力：0.069MPa； 气帘气压力：0.069MPa； g) 辅助气流速：6L/min； h) 离子源温度：450℃C； i) 定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压见表1。 表1氨苯的定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压 定性离子对 定量离子对 碰撞气能量/ 去簇电压/ 化合物中文名称 化合物英文名称 (m/) (m/α) V V 249/156 249/156 22 75 氨苯矾 dapsone 249/108 33 249/92 37 7.4液相色谱-串联质谱测定 7.4.1定性测定 被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同的试验条件下，样品中待测物质的保留时间与 标准溶液中对应的保留时间偏差在土2.5%之内；且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标 准溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，若偏差不超过表2规定的范围，则可判定样品中存在对 应的待测物。 表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 以%表示 相对离子丰度K K>50 20<K<50 10<K<20 K≤10 允许最大偏差 ±20 ±25 ±30 ±50 7.4.2定量测定 用基质标准工作溶液（4.11）分别进样，以峰面积为纵坐标，工作溶液浓度为横坐标，绘制标准工作 曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中氨苯砜的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在 上述色谱条件和质谱条件下，氨苯矾的参考保留时间为5.21min。氨苯的标准物质总离子流图参见 附录A中的图A.1。 本方法的添加平均回收率数据参见附录B中的表B.1。 7.5平行试验 按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。 7.6空白试验 除不称取样品外，均按上述步骤进行。 8结果计算 蜂蜜中氨苯残留量的测定结果按式（1)计算。 V 1 000 1000 m 式中： X- 一试样中被测组分残留量，单位为微克每千克（ug/kg）； 从标准工作曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）； 3