ICS 67.050 X 04 GP 中华人民共和国国家标准 GB/T22951—2008 河豚鱼、鳗鱼中十八种 磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of 18 sulfonamides residues in fugu and eel- LC-MS-MS method 2008-12-31发布 2009-05-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T22951—2008 前言 本标准的附录A、附录 B为资料性附录。 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局 本标准主要起草人：贾光群、曹彦忠、张进杰、石玉秋、姚智慧、庞国芳。 GB/T22951—2008 河豚鱼、鳗鱼中干八种 磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 1范围 本标准规定了河豚鱼、鳗鱼中十八种磺胺类药物（见表2）残留量液相色谱-串联质谱测定方法。 本标准适用于河豚鱼、鳗鱼中十八种磺胺类药物残留量的测定。 本标准的方法检出限均为5.0μg/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义 (GB/T6379.1—2004,ISO5725-1:1994,IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法（GB/T6379.22004，ISO5725-2：1994，IDT） GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008,ISO36961987,MOD） 3原理 SAG 河豚鱼、鳗鱼中磺胺类药物残留用乙睛提取，离心，上清液经无水硫酸钠脱水后，用氮气浓缩仪吹至 谱-串联质谱仪测定，内标法定量 4试剂和材料 4.1水：GB/T6682，一级。 4.2 甲醇：色谱纯。 4.3 乙：色谱纯。 4.4甲酸：色谱纯。 4.5 正已烷：色谱纯。 4.6 乙酸铵：优级纯。 4.7 无水硫酸钠：经650℃灼烧4h，置于干燥器中备用。 4.8 0.01mol/L乙酸铵溶液：称取0.77g乙酸铵（4.6）溶于1000mL水中。 （4.8）混合均匀。 4.100.1%甲酸溶液：吸取1.0mL甲酸（4.4),用水稀释至1000mL。 4.11十八种磺胺类药物标准物质：磺胺嘧啶（CAS：68-35-9）、磺胺噻唑（CAS：72-14-0）、磺胺吡啶 （CAS：144-83-2）、磺胺甲基嘧啶（CAS：127-79-7）、磺胺-6-甲氧嘧（CAS：1220-83-3）、磺胺甲噻二唑 （CAS:144-82-1）、磺胺二甲嘧啶（CAS:57-68-1）、磺胺甲氧哒嗪（CAS:80-35-3）、磺胺对甲氧嘧啶（CAS： 1 GB/T22951—2008 651-06-9）、磺胺氯哒嗪（CAS:80-32-0）、磺胺甲基异嗯唑（CAS：723-46-6）、磺胺邻二甲氧嘧啶（CAS： （CAS:102-65-8）、磺胺苯吡唑（CAS：526-08-9）、磺胺间二甲氧嘧啶（CAS：1037-50-9）、磺胺喹嗯啉 (CAS:59-40-5)。纯度≥99%。 4.120.1mg/mL标准储备溶液：准确称取适量的每种磺胺类药物标准物质（4.11），用甲醇（4.2）分别 配成0.1mg/mL的标准储备溶液，该溶液在4℃保存。 4.135.0μg/mL磺胺类药物混合标准工作溶液：分别吸取各标准储备溶液（4.12)0.5mL移至10mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配成5.0μg/mL混合标准工作溶液。该溶液在4℃保存。 4.14磺胺内标物质：磺胺甲基异唑-D4、磺胺嘧啶-D4、磺胺噻唑-D4。纯度≥99%。 甲基异嗯唑-D4，磺胺啶-D4，磺胺噻唑-D4标准物质（4.14),用甲醇分别配成0.1mg/mL。该溶液 在4℃保存。 4.16磺胺类药物混合内标工作溶液：分别吸取磺胺甲基异唑-D4，磺胺嘧啶-D4，磺胺噻唑-D4储备 溶液（4.15)0.5mL移至10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配成浓度为5μg/mL混合内标工作溶 液。该溶液在4℃保存。 4.17基质标准工作溶液：吸取不同体积混合标准工作溶液（4.12）和4μL混合内标工作溶液（4.16）， 用空白样品提取液配成5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL50.0ng/mL、100.0ng/mL不同浓度的 基质标准工作溶液。当天配制。 4.18滤膜：0.2μm。 5仪器 5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源 5.2分析天平：感量0.1mg,0.01g。 5.3离心管：50mL。 5.4均质器。 5.5液体混匀器。 5.6离心机。 5.7 氮气浓缩仪。 5.8浓缩管：10mL。 6试样的制备与保存 6.1试样的制备 从全部样品中取出有代表性样品约1kg，充分搅碎，混匀，均分成两份，分别装人洁净容器内。密 封，作为试样，标明标记。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 6.2试样保存 将试样于一18℃冷冻保存。 7测定步骤 7.1样品制备 称取10g试样，精确至0.01g。置于50mL离心管（5.3）中，加入20μL内标工作溶液（4.16），然 后加入20g无水硫酸钠（4.7）和25mL乙腈（4.3），均质2min，以3000r/min离心3min。上清液转 移至50mL容量瓶中，残渣再加入20mL乙睛，重复上述操作一次。合并提取液，用乙睛定容至刻度 后，混匀。吸取10mL至浓缩管（5.8）中，在45℃水浴中氮气吹至近干。准确加人1mL定容液（4.9） 2 GB/T 22951—2008 和1mL正已烷（4.5）溶解残渣，涡旋1min，以3000r/min离心3min，吸取上层正已弃去，再加入 1mL正已烷，重复上述步骤，直至下层水相变成透明液体。取下层清液，过0.2μm滤膜（4.18）后，用 液相色谱-串联质谱仪测定 按上述操作步骤制备样品空白提取液。 7. 2 测定条件 7.2. 1 液相色谱参考条件 a) 色谱柱：Atlantis，3μm，150mm×2.1mm(内径）或相当者； b) 流动相：A：乙腈，B：0.1%甲酸溶液，C：甲醇。梯度洗脱条件见表1； c) 流速：0.2mL/min; (P 柱温：35℃； e) 进样量：20μL。 表1 流动相梯度条件 时间/min A/% B/ % C/% 0.00 10.0 80.0 10.0 3.00 20.0 70.0 10.0 8. 00 35.0 55.0 10. 0 12.00 70. 0 20.0 10, 0 12.01 10.0 80.0 10.0 17.00 10.0 80.0 10.0 7.2.2 质谱参考条件 a) 离子源：电喷雾离子源； b) 扫描方式：正离子扫描； c) 检测方式：多反应监测； d) 电喷雾电压：5500V； e) 雾化气压力：0.076MPa； f) 气帘气压力：0.069MPa； g) 辅助气流速：6L/min； h) 离子源温度：350℃； i) 定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压见表2。 表 2 十八种磺胺类药物的定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压 定性离子对 定量离子对 化合物中文名称 化合物英文名称 碰撞气能量/V 去簇电压/V (m/) (m/z) 251/156 23 55 磺胺嘧啶 sulfadiazine 251/156 251/185 27 50 256/156 22 55 磺胺噻唑 sulfathiazole 256/156 256/107 32 47 250/156 25 50 磺胺吡啶 sulfapyridine 250/156 250/184 25 60 265/156 25 50 磺胺甲基嘧啶 sulfamethoxypyridazine 265/156 265/172 24 60 281/156 25 65 磺胺-6-甲氧嘧啶 sulfamonomethoxine 281/156 281/215 25 50 3