ICS 67.050 X 04 中华人民共和国国家标准 GB/T22955—2008 河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中苯并咪唑类药物 残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of benzimidazoles residues in fugu,eel and baked eel- LC-MS-MS method 2008-12-31发布 2009-05-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T22955—2008 前言 本标准的附录A、附录B为资料性附录 本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局、中华人民共和国广东出人境检验检 疫局。 本标准主要起草人：林峰、林海丹、吴映璇、张美金、邵琳智、庞国芳。 GB/T22955—2008 河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中苯并咪唑类药物 残留量的测定液相色谱-串联质谱法 1范围 本标准规定了河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中苯并咪唑类药物和代谢物残留量的液相色谱-串联质谱检 方法。 本标准适用于液相色谱-串联质谱法测定河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中奥芬达唑、芬苯达唑及它们的代谢 谢物氨基甲苯咪唑、羟基甲苯咪唑，氟苯咪唑及其代谢物2-氨基氟苯咪唑，噻苯咪唑及其代谢物5-羟基 噻苯咪唑，噻苯咪唑酯，氧苯达唑的残留量。 本标准的方法检出限：奥芬达唑、芬苯达唑、奥芬达唑砜、阿苯达唑、阿苯达唑-2-氨基砜、阿苯达唑 亚砜、阿苯达唑砜、甲苯咪唑、氨基甲苯咪唑、羟基甲苯咪唑、氟苯咪唑、2-氨基氟苯咪唑、噻苯咪唑、5-羟 基噻苯咪唑、噻苯咪唑酯、氧苯达唑均为0.010mg/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义 (GB/T6379.1—2004,ISO5725-1:1994,IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法（GB/T6379.2—2004,ISO5725-2：1994,IDT） GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682一2008，ISO3696：1987，MOD） 3原理 试样在碱性条件下以乙酸乙酯提取、离心、浓缩后，残渣以乙-0.1mol/L盐酸溶液溶解，正已烷 脱脂，经MCX固相萃取柱净化。样品溶液供液相色谱-串联质谱仪检测，外标峰面积法定量。 4试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1乙酸乙酯。 4.2正已烷。 4.3甲醇：色谱纯。 4.4乙睛：色谱纯。 4.5无水硫酸钠：经650℃灼烧4h，置于干燥器内备用。 4.62,6-二叔丁基对甲酚（BHT)。 4.7盐酸。 1 GB/T22955—2008 4.8氢氧化钾。 4.925%氨水。 4.10甲酸：优级纯。 4.11乙酸铵。 4.121%BHT溶液：称取1.0gBHT，乙酸乙酯溶解并稀释至100mL，临用前配制。 4.130.1mol/L盐酸溶液：量取浓盐酸9mL，加水稀释至1000mL。 4.140.005mol/L甲酸溶液：准确吸取188μL甲酸，加水稀释至1000mL。 4.15 550%氢氧化钾溶液：50g氢氧化钟溶解于100mL水中，冷却至室温后待用。 4.1610%氨乙腈溶液：量取10mL25%氨水，乙腈稀释至100mL，临用前配制。 4.170.025mol/L乙酸铵溶液：1.93g乙酸铵溶解于1000mL水中。 奥芬达唑矾（oxfendazolesulfone，CAS：54029-20-8），阿苯达唑（albendazole，CAS：54965218）、阿苯达 CAS:54029-12-8）、阿苯达唑砜（albendazolesulfone，CAS：75184-71-3）甲苯咪唑（mebendazole，CAS： 14798000）、氨基甲苯咪唑（mebendazole-amine，CAS：52329-60-9）、羟基甲苯咪唑（5-hydroxymeben- dazole，CAS：60254-95-7）、氟苯咪唑（flubendazole，CAS：13678000）、2-氨基氟苯咪唑（2-aminofluben- dazole）、噻苯咪唑（thiabendazole，CAS：148798）、噻苯咪唑酯（cambendazole，CAS：26097-80-3）、氧苯达 唑（oxibendazole，CAS：20559-55-1）标准品：含量均在98%以上，5-羟基噻苯咪唑（thiabendazole-5-hy droxy，CAS：17450500）标准溶液浓度为10mg/L。 4.19标准溶液 4.19.1标准储备液 准确称取按其纯度折算为100%质量的奥芬达唑、芬苯达唑、奥芬达唑、阿苯达唑、阿苯达唑-2-氨 噻苯咪唑、噻苯咪唑酯、氧苯达唑标准品各10mg（精确至0.1mg），分别用甲醇溶解并定容至100mL， 配成标准储备溶液浓度为100μg/ml。 4.19.2混合标准工作溶液 根据需要，用乙睛-水（1十4）将标准储备液（4.19.1）及5-羟基噻苯咪唑标准溶液配成适用浓度的混 合标准工作溶液。混合标准工作溶液使用前配制 4.20固相萃取柱：阳离子交换固相萃取柱MCX柱或相当者，150mg/6mL。使用前依次用5mL甲 醇活化、5mL0.1mol/L盐酸平衡。 4.21滤膜：0.2μm。 5仪器 5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 5.2 组织捣碎机。 5.3勾浆机：转速大于或等于8000r/min。 5.4涡旋振荡器。 5.5离心机：转速大于或等于4000r/min。 5.6 减压旋转蒸发仪。 5.7 超声波水浴。 2 GB/T22955—2008 5.8分析天平：感量0.1mg，0.01g。 6制样方法 从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分约500g，用组织捣碎机充分捣碎均匀，装入洁净容 器中，密封，并标明标记，于一18C以下冷冻存放。 制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 7分析步骤 7.1提取 称取2g样品（准确至0.01g），于50mL离心管中，加人20mL乙酸乙酯（4.1）、0.15mL50%氢 氧化钾溶液（4.15）、1mL1%BHT溶液（4.12）置超声波水浴中振荡5min，勾浆机上8000r/min均质 30s，加人1g无水硫酸钠，混匀，4000r/min离心5min，清液转移至100mL梨形瓶中；另取一离心管， 加人20mL乙酸乙酯、0.15mL50%氢氧化钾溶液和1mL1%BHT溶液洗涤匀浆机刀头；用玻棒捣碎 离心管中的沉淀，加人上述洗涤匀浆机刀头的碱性乙酸乙酯溶液，在涡旋振荡器上振荡2min，置超声 波水浴中振荡5min，4000r/min离心5min，清液合并至100mL梨形瓶中，38C减压旋转蒸发至干。 7.2净化 上述残渣马上用1.5mL乙睛溶解，涡旋混匀，超声5min，加人1.5mL0.1mol/L盐酸溶液 混匀，4000r/min离心5min，弃上层正已烷层，加入3mL正已烷重复操作一次。 脱脂后的样液加入3mL0.1mol/L盐酸溶液，涡旋混匀，注人已活化处理的MCX固相萃取柱 （4.20），依次用5mL0.1mol/L盐酸溶液、5mL甲醇（4.3）淋洗，15mL10%氨乙腈溶液（4.16）洗脱，洗脱 液38℃减压旋转蒸发至干，残渣加人0.5mL乙腈，置超声波水浴中振荡5min，加人1.5mL0.025mol/L 乙酸铵溶液（4.17），涡旋混匀，吸取100L该样液，加入1900L乙晴-水（1+4）混匀后过0.2um滤 膜（4.21），供液相色谱-串联质谱仪测定。 7.3测定条件 7.3.1液相色谱参考条件 a){ 色谱柱：YMCCis，3um，150mm×2.1mm内径）或相当者； b) 流动相：乙腈：0.005mol/L甲酸溶液（4.14），梯度洗脱；乙腈：15%~80%（7min内线性增 加），80%保持2min，80%~15%（0.01min内线性递减），15%保持11min； 流速：0.25mL/min； d) 柱温：40℃； e) 进样量：5uL。 7. 3. 2 质谱参考条件 a) 离子化模式：电喷雾电离正离子模式（ESI+）； b) 质谱扫描方式：多反应监测（MRM）； c) 分辨率：单位分辨率； d) 雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适气体，使用前应调节各气体流 量以使质谱灵敏度达到检测要求，喷雾电压、去集簇电压、碰撞能等电压值应优化至最佳灵 敏度； e）16种苯并咪唑类药物的定性离子对、定量离子对和去集簇电压、碰撞气能量、参考保留时间见 表 1。 3