ICS 67.050 X 04 GR 中华人民共和国国家标准 GB/T22983—2008 牛奶和奶粉中六种聚醚类抗生素 残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of six polyether antibiotics residues in milk and milk powder-LC-MS-MS method 2008-12-31发布 2009-05-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T22983—2008 前言 本标准附录A、附录B为资料性附录。 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局、中华人民共和国青海出人境检验检 疫局。 本标准主要起草人：薄海波、曹彦忠、離丽丽、贾光群、星玉秀、李连通、庞国芳 GB/T22983—2008 牛奶和奶粉中六种聚醚类抗生素 残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 1范围 本标准适用于液态奶（包括原料奶、纯牛奶、脱脂牛奶）和奶粉（包括纯奶粉、脱脂奶粉和婴幼儿配方 奶粉）中拉沙洛菌素（lasalocid）、莫能菌素（monensin）、尼日利亚菌素（nigericin）、盐霉素（salinomycin）、 甲基盐霉素（narasin），马杜霉素铵（madubamycinammonium）残留量的测定 本标准的方法检出限：牛奶中拉沙洛菌素、莫能菌素、尼日利亚菌素、盐霉素、甲基盐霉素、马杜霉素 铵检出限均为0.2μg/L；奶粉中拉沙洛菌素、莫能菌素、尼日利亚菌素、盐霉素、甲基盐霉素、马杜霉素 铵检出限均为1.6ug/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义 (GB/T6379.12004.ISO5725-1:1994,IDT) GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法（GB/T6379.2—2004ISO5725-2：1994,IDT） GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008，ISO3696：1987,MOD） 3原理 试样中聚醚类抗生素，用乙睛提取，固相萃取柱净化，高效液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。 4试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯。 4.1水:GB/T6682，一级。 4.2乙睛：色谱纯。 4.3甲醇：色谱纯。 4.4正已烷：色谱纯， 4.5 乙睛饱和的正已烷：取少量乙（4.2）加人正已烷（4.4）中，充分混匀。静止分层后，取上层正 已烷。 4.6甲酸：优级纯。 4.7乙酸铵：优级纯， 4.8无水硫酸钠：用前在650℃灼烧4h，置于干燥器中冷却后备用。 4.9水系流动相：1mL甲酸与0.385g乙酸铵溶于1000mL水，混匀。当天配制 4.10甲醇溶液（1+1）：100mL甲醇与100mL水混合均匀。 1 GB/T22983—2008 4.11拉沙洛菌素（CAS25999-20-6）、莫能菌素（CAS22373-78-0）、尼日利亚菌素（CAS28643-80-3）、 盐霉素（CAS55721-31-8）、甲基盐霉素（CAS55134-13-9）、马杜霉素铵（CAS84878-61-5）标准品：纯度 大于等于95%。 4.12标准储备溶液：准确称取适量的每种标准物质（4.11），分别用甲醇（4.3）配制成浓度为1mg/mL 标准储备溶液。储备液贮存在一18℃冰柜中。 4.13标准工作溶液：吸取1.00mL标准储备溶液（4.12），移人100mL棕色容量瓶，用甲醇定容，该溶 液浓度为10μg/mL，贮存在0℃～4℃冰箱中。 4.14OasisHLB固相萃取小柱或相当者：3mL，60mg。使用前依次用3mL甲醇和5mL水活化小 柱，保持柱体湿润。 4.15滤膜：0.2μm。 5仪器和设备 5.1液相色谱-串联质谱联用仪：配有电喷雾离子源（ESI源）。 5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。 5. 3 旋涡混匀器。 5.4振荡器。 5.5 5离心机：最大转速不低于5000r/min。 5.6 移液器:1 mL。 5.7 自动浓缩仪或相当者。 5. 8 浓缩瓶：50mL。 5.9固相萃取装置。 5.10氮气吹干仪。 6试样制备与保存 6.1试样的制备 从全部样品中取出有代表性样品约1kg，充分混匀，均分成两份，分别装人洁净容器内。密封后作 为试样，标明标记。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 6.2试样的保存 将试样于4℃保存 7测定方法 7.1提取 7.1.1牛奶样品 称取10.0g混匀的试样于50mL聚丙烯离心管中，加无水硫酸钠（4.8）约10g和乙睛（4.2 2×20mL，涡旋混匀1min，振荡10min，以3000r/min离心3min。合并上清液，加10mL乙腈饱和 的正已烷（4.5），涡旋1min，弃去正已烷，减压浓缩至近干。用4mL甲醇溶液（4.10）溶解残渣，待 净化。 7.1.2奶粉样品 称取12.5g奶粉于烧杯中，加适量35℃～50℃水将其溶解，待冷却至室温后，用水定容至 100mL，充分混匀。量取10.0g样品溶液于50ml聚丙烯离心管中，按7.1.1步骤提取。 7.2净化 将7.1所得的样品溶液加载到固相萃取柱中，并用2mL甲醇溶液（4.10）淋洗浓缩瓶，并人固相萃 取柱，依次用5mL水和3mL甲醇溶液（4.10）淋洗柱体，4mL甲醇（4.3）洗脱。用氮气吹干仪将洗脱 液吹干，用1.0mL甲醇溶解，过0.2μum滤膜，供液相色谱-串联质谱测定。 2 GB/T 22983—2008 7.3基质标准工作溶液的制备 称取6份阴性样品各10.0g，置于50mL具塞的聚丙烯管中，分别加人不同体积的六种聚醚类抗 生素的标准工作溶液（4.13），按6.1和6.2步骤操作。制备成浓度为1.0ng/mL、5.0ng/mL、 10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL、100.0ng/ml的基质标准工作溶液。 7.4测定条件 7.4.1液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下： a) : 色谱柱：BEHCis，1.7um，50mmX2.1mm（内径）或相当者； b) 柱温：40℃C； c) 进样量：5.0μL； d) 流动相：流动相A：甲醇（4.3），流动相B：水系流动相（4.9）。洗脱程序及流速见表1。 表1流动相梯度程序及流速 时间/min 流速/（uL/min） A/% B/% 0.00 250 90.0 10.0 2.00 250 70.0 30.0 2.01 250 90 10. 0 2.50 250 06 10.0 7.4.2 串联质谱参考条件 串联质谱参考条件如下： a) 离子源：电喷雾离子源； b) 扫描方式：正离子扫描； c) 检测方式：多反应监测； d) 毛细管电压：2.8kV； e) 离子源温度：110℃； ( 去溶剂气温度：380℃； g) 去溶剂气（氮气）流量：600L/h； h) 锥孔气（氮气）流量：50L/h； i) 碰撞气流量：0.1L/h； j) 锥孔电压、碰撞能量和驻留时间等质谱参数及母离子和子离子详见表2。 表2六种聚醚类抗生素的质谱参数和保留时间 子离子 子离子 保留时间/ 母离子 碰撞能量/ 驻留时间/ 锥孔电压/ 化合物名称 （定量） （定性） min (m/2) v ms V (m/2) (m/2) 377.1 28 拉沙洛菌素 1.48 613.5 377.1 50 72 595.3 38 675.6 51 莫能菌素 1. 23 693.5 675.6 50 65 479.3 40 尼日利亚 657.6 30 1.76 742.7 657.6 50 42 菌素 461.4 25 3