ICS 65.020.99 CCS B 04 团 体 标 准 T / N A I A 0 2 6 —2 0 2 1T/NAIA 0219-2023 枸杞中94种农药及代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱联用法 Determination of 94 pesticide and its metabolites residues in wolfberry Liquid chromatography-tandem mass spectrometry 2023-08-28发布 2023-08-31实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 发布TB 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规 则》的规定起草。 本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。 本文件起草单位：宁夏农产品质量标准与检测技术研究所、 宁夏化学分析测试协会。 本文件主要起草人 ：牛艳、陈翔、吴燕、赵子丹、杨静、刘霞、苟春林、王晓菁、张锋 锋、开建荣、葛谦、马小龙、季莉、高颖银、单巧玲、张小飞。 本文件为首次发布。 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0219-2023 1枸杞中 94种农药及代谢物残留量的测定 液相色谱 -质谱联用法 1 范围 本文件规定了枸杞中 94种农药及代谢物残留量的液相色谱 -质谱联用测定方法。 本文件适用于枸杞中 94种农药及代谢物残留量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期 的引用文件， 仅该日期对应的版本适用本文件 ；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所 有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 试样用乙腈提取 ，提取液经 PSA、C18和GCB分散固相萃取净化 ，采用液相色谱 -质谱 联用仪检测 ，保留时间和离子对定性，外标法定量。 5 试剂与材料 除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂，水为 GB/T 6682规定的一级水。 5.1 试剂 5.1.1 乙腈（ CH 3CN，CAS号： 75-05-8）：色谱纯。 5.1.2 氯化钠（ NaCl，CAS号： 7647-14-5 ）。 5.1.3 无水硫酸镁（ MgSO 4，CAS号： 7487-88-9 ）。 5.1.4 柠檬酸钠二水合物（ C6H5Na3O7·2H 2O，CAS号： 6132-04-3 ）。 5.1.5 柠檬酸氢二钠倍半水合物（ C6H6Na2O7·1.5H 2O，CAS号： 6132-05-4 ）。 5.2 标准品 94种农药标准品， 参见附录 A，纯度均≥95  %。 5.3 标准溶液配制 5.3.1 标准储备溶液：分别称取适量（ 精确至 0.1  mg）各农药标准品，用丙酮溶解，配制 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0219-2023 2成1000   mg/L标准储备液，避光 -18  ℃保存，有效期 1年。 5.3.2 混合标准溶液： 吸取一定量的单个农药标准储备溶液于 10  mL容量瓶中，用丙酮定 容至刻度。 混合标准溶液浓度为 10  mg/L，避光 -18  ℃保存，有效期 1个月。 5.3.3 基质混合标准工作溶液：根据需要分取适量混合标准溶液，氮气吹干，加入一定量的 空白基质溶液，混匀。基质混合标准工作溶液现用现配。 5.4 材料 5.4.1 乙二胺 -N-丙基硅烷化硅胶（ PSA）：粒径 40  μm～63  μm。 5.4.2 十八烷基硅烷键合硅胶（ C18）：粒径 40  μm～63  μm。 5.4.3 石墨化炭黑（ GCB）：粒径 40  μm～120  μm。 5.4.4 微孔滤膜：有机相， 0.22μm。 6 仪器与设备 6.1 液相色谱 -三重四极杆质谱联用仪（ LC-MS/MS ）：配有电喷雾离子源（ ESI）。 6.2 分析天平： 感量 0.1  mg和0.01  g。 6.3 高速匀浆机： 转速不低于 12 000  r/min。 6.4 离心机： 转速不低于 4 000  r/min。 6.5 氮吹仪：可控温。 6.6 组织捣碎机。 6.7 高速粉碎机。 6.8 涡旋混合器。 7 试样制备 7.1 枸杞鲜果用组织捣碎机匀浆，放入样品瓶或袋中。 7.2 枸杞干果，于 -18  ℃冷冻 2  h后立即用高速粉碎机粉碎，或直接加液氮粉碎，放入样品 瓶或袋中。 7.3 制备试样于 -18  ℃冷冻保存，备用。 8 分析步骤 8.1 试样提取及净化 8.1.1 枸杞鲜果 称取匀浆试样 10  g（精确至 0.01  g）于50  mL离心管， 加入 20.0  mL乙腈，用高速匀 浆机于 12 000  r/min匀浆 2  min，加入 4  g无水硫酸镁、 1  g氯化钠、 1  g柠檬酸钠二水合 物、0.5  g柠檬酸氢二钠倍半水合物 ，剧烈振摇 1  min，4 000  r/min离心 5  min。吸取 1.00  mL 上清液至盛有净化材料的 15  mL离心管中（ 每毫升提取液用 150  mg无水硫酸镁、 25  mg PSA、10  mg C18和3  mg GCB），涡旋 1  min，4 000  r/min离心 5  min，再将上清液过微 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0219-2023 3孔滤膜上机测定。 8.1.2 枸杞干果 称取粉碎试样 5  g（精确至 0.01  g）于50  mL离心管， 加入 10.0  mL水浸泡 30  min， 加入 20.0  mL乙腈，用高速匀浆机于 12 000  r/min匀浆 2  min，加入 4  g无水硫酸镁 、1  g 氯化钠、 1  g柠檬酸钠二水合物、 0.5  g柠檬酸氢二钠倍半水合物， 剧烈振摇 1  min，4 000   r/min离心 5  min。吸取 1.00  mL上清液至盛有净化材料的 15  mL离心管中 （每毫升提取液 用150   mg无水硫酸镁 、25  mg PSA、10  mg C18和3  mg GCB），涡旋 1  min，4 000  r/min 离心 5  min，再将上清液过微孔滤膜上机测定。 8.2 测定 8.2.1 液相色谱参考条件 a）色谱柱： C18柱， 100mm×2.1mm （i.d）， 3.5μm，或性能相当者。 b）柱温： 40℃。 c）流速： 0.4mL/min 。 d）流动相梯度： 见表 1。 表1 流动相洗脱条件 时间 /min 0.1%甲酸水 /% 甲醇 /% 0 70 30 0.5 70 30 0.6 10 90 7.75 95 5 10.2 95 5 11.5 10 90 15.0 10 90 15.1 70 30 19.0 70 30 e）进样量： 1.0μL。 8.2.2 质谱参考条件 a）电离方式： ESI； b）喷雾电压： -2.5kV、+3.5kV； c）离子传输管温度： 325 ℃； d）雾化温度： 350 ℃； e）鞘气： 35 arb； f）辅气： 10 arb。 g）选择反应监测（ SRM）：每种农药分别选择 2个子离子，保留时间、母离子、子离 子及离子对质谱参数，参见附录 B。 全国团体标准信息平台 T/NAIA 0219-2023 48.2.3 定性测定 在8.2条件下，被测试样中检出色谱峰的保留时间与相应标准品色谱峰的保留时间相一 致，扣除背景的样品质谱图中 ，定性和定量离子均出现 ，相对丰度比与质量浓度相当的标准 工作溶液相对丰度一致 ，且相对丰度允许偏差不超过表 1规定的范围 ，则可判断样品中存在 目标农药。 本方法的标准物质选择反应监测 LC-MS/MS 图参见附录 D。 表2 定性时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 >50 % 20%至50% 10%至20% ≤10% 允许相对偏差 ±20% ±25% ±30% ±50% 8.2.4 定量测定 本方法采用外标法定量，定量用标准溶液采用空白基质混合标准工作溶液，标准溶液 浓度应与待测目标农药的浓度相近。 8.3 平行试验 按上述步骤对同一试样进行平行试验测定。 8.4 空白试验 除不加试样外，其他按上述步骤进行操作。 9 结果计算 试样中各农药的含量按式（ 1）计算，结果需扣除空白值。 ………………………… （1） 式中： X —— 试样中被测物残留量的数值 ，单位为毫克 每千克（mg/kg）； A —— 试样溶液中被测物的质量色谱图峰面积 ； V —— 提取液体积的数值 ，单位为毫升（ mL）； CS —— 基质标准工作溶液中 被测物的质量浓度的数值