ICS 13.060.30 CCS Z 16 团 体 标 准 T / N A I A 0 2 6 —2 0 2 1T/ NAIA 0218-2023 污水中11种毒品及其代谢物和人口标记 物可替宁的测定 液相色谱-三重四极杆 质谱法 Determination of 11 illicit drugs and their metabolites residues & cotinine of demographic marker in sewage Liquid chromatography- tandem mass spectrometry 2023-08-28发布 2023-08-31实施 宁夏化学分析测试协会 发 布 发布TB 全国团体标准信息平台 前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规 则》的规定起草。 本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。 本文件起草单位 ：众旺达（宁夏）技术咨询有限公司 、宁夏中科精科检测技术有限公司 、 宁夏凯普检测有限公司、宁夏化学分析测试协会。 本文件主要起草人 ：刘娜娜、张院萍、路喜龙、宋克纯、徐亚宁、李慧芳、王彤、何保 宏、杨永刚、曹伟、何晓丽、周晶晶、李宁军、孙飞、撒世军、李超、张小飞。 本文件为首次发布。 全国团体标准信息平台 1污水中 11种毒品及其代谢物和人口标记物可替宁的测定 液相色谱 -三重四极杆质谱法 1 范围 本文件规定了污水中 11种毒品及其代谢物 （O6-单乙酰吗啡 、可卡因、可待因、苯甲酰 爱康宁、吗啡、氯胺酮、去甲氯胺酮、 3,4-亚甲基二氧甲基苯丙胺（ 以下简称 MDMA）、 3,4-亚甲二氧基苯丙胺（ 以下简称 MDA）、甲基苯丙胺、苯丙胺）和人口标记物可替宁含 量的液相色谱 -三重四极杆质谱测定方法。 本文件适用于污水中 11种毒品及其代谢物和人口标记物可替宁含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期 的引用文件， 仅该日期对应的版本适用本文件 ；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所 有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 HJ 91.1 污水监测技术规范 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 本方法用工作曲线作对照 ，按照平行操作要求 ，向试样中加入同位素内标 ，并进行提取 、 净化、浓缩，采用液相色谱 -三重四极杆质谱法在多反应监测模式下检测，以保留时间和特 征离子对进行定性，内标法定量。 5 试剂与材料 除非另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水符合 GB/T 6682中规定的一级水。 5.1 盐酸（ HCl）。 5.2 甲醇（ CH 3OH）： HPLC级。 5.3 乙腈（ C2H3N）： HPLC级。 5.4 甲酸（ HCOOH）： HPLC级。 5.5 氨水（ NH 3·H2O）： HPLC级。 5.6 甲酸水溶液： 0.1%(CH 3OH)。 全国团体标准信息平台 2 移取 1000 μL甲酸（ 5.4）于1000 mL水中。 5.7 氨水 -甲醇溶液 (5+95)：用氨水（ 5.5）和甲醇（ 5.2）按5+95体积比混合。 5.9 标准溶液 以下所有标准溶液应恢复至室温并摇匀后使用。 5.9.1 标准贮备液： ρ=100 μg/mL 购买市售有证标准溶液， 组分包括 O6-单乙酰吗啡、可卡因、可待因、苯甲酰爱康宁 、 吗啡、氯胺酮、去甲氯胺酮 、MDMA、MDA、甲基苯丙胺 、苯丙胺，溶剂为甲醇 。贮备液 于 -20 ℃冷冻密封避光保存或参照制造商的产品说明保存。 5.9.2 可替宁标准贮备液： ρ=1000 μg/mL 购买市售有证可替宁标准贮备溶液，溶剂为甲醇。 -20 ℃冷冻密封避光保存或参照制造 商的产品说明保存。 5.9.3 混合标准物质中间液： 用5.9.1和5.9.2贮备溶液用甲醇稀释得到 ，使11种毒品及其代谢物与可替宁为 （1:10） 浓度的关系配制，密封后置于冰箱冷冻保存， 有效期 6个月。 5.9.4 混合标准物质使用液： 用5.9.3标准物质使用液浓度为 0.5~50 μg/L，对应可替宁标准使用液浓度为 5~500 μg/L， 溶剂为甲醇。密封，置于冰箱冷藏保存， 有效期 1个月。 5.10 氘代内标溶液： 5.10.1 氘代内标标准贮备液： ρ=100 μg/mL 购买市售氘代内标标准贮备液， 推荐组分为 O6-单乙酰吗啡 -D3、可卡因 -D3、可待因 -D3、苯甲酰爱康宁 -D3、吗啡 -D3、氯胺酮 -D4、去甲氯胺酮 -D4、MDMA-D 5、MDA-D 5、甲 基苯丙胺 -D5、苯丙胺 -D5、可替宁 -D3，溶剂为甲醇 。贮备液于 -20 ℃冷冻密封避光保存或参 照制造商的产品说明保存。 5.10.2 氘代内标混合中间液： 移取 5.10. 1标准贮备液， 配制成 10 μg/mL氘代内标混合中间液，溶剂为甲醇。密封， 置于冰箱 -20 ℃冷冻保存， 有效期 6个月。 5.10.3 氘代内标混合使用液： 将氘代内标混合中间液 配制成 250 μg/L的氘代内标混合使用液，溶剂为甲醇。密封， 置于冰箱 -20 ℃冷冻保存， 有效期 1个月。 6 仪器与设备 6.1 液相色谱 -三重四极杆质谱仪：带有梯度洗脱功能，质谱为带电喷雾离子源（ ESI）的。 6.2 色谱柱： 填料粒径 1.8 μm，柱长 100 mm，内径 2.1 mm的C18反向液相色谱柱，或及 其它等效柱。 6.3 混合型强 阳离子交换反相柱： MCX，30mg/3mL 或等效固相萃取柱。 6.4 固相萃取装置：自动或手动，流速可调节。 6.5 氮吹浓缩或真空浓缩装置。 6.6 一般实验室常用仪器和设备。 全国团体标准信息平台 37 样品 7.1 样品采集与保存 7.1.1按照 HJ/T 91 的相关规定进行水样的采集和保存。 采集水样的体积不得少于 1000mL。 7.1.2采集的水样应置于干净的 PP材质的采样瓶中 ，并尽快分析 。如不能立即分析时 ，应加 入盐酸（ 5.1）至 pH＜2，置于 4℃下运输保存，到达实验室后应置于 -20 ℃冷冻保存，保存 时间不超过 10 d。 7.2 试样制备 7.2.1 预处理 将污水样品完全解冻后 ，充分摇匀 。过0.45 μm玻璃纤维滤膜 ，并量取 50.00 mL加入 20 μL氘代内标混合使用液（ 5.10.2）。 7.2.2 固相萃取及浓缩 7.2.2. 1依次用 4 mL甲醇（ 5.2）、4 mL水和 4 mL pH为2的水对固相萃取小柱（ 6.3）进行 活化，流速不超过 4mL/min；取上述预处理样品（ 7.2.1）通过活化好的固相萃取小柱，控制 流速约为 2 mL/min；用4 mL水和 4 mL甲醇（5.2）淋洗固相萃取小柱 ，流速不超过 4 mL/min， 并增加固相萃取装置（ 6.3）的压力，使小柱内的水分排干； 用4 mL氨水 -甲醇溶液（ 5.7） 从小柱洗脱目标化合物， 洗脱流速小于 1 mL/min。 7.2.2. 2将上述淋洗液置于浓缩装置中，浓缩至近干。 用250 μL 0.1%甲酸溶液（ 5.6）复溶， 混合均匀， 过0.22 μm滤膜，待测。 7.3 空白样品 以自来水为空白样品，与污水样品平行操作，得到空白提取液。 8 分析步骤 8.1 仪器参考条件 8.1.1 液相色谱参考条件 流动相 A：0.1%甲酸水溶液（ 5.6），流动相 B：乙腈（ 5.3），梯度程序见表 1；流速： 0.2mL/min ，柱温： 35 ℃，进样体积： 5 μL。 表1 推荐梯度洗脱条件 时间/min 流动相A/% 流动相B/% 1 95 5 2 85 15 8 70 30 8.5 5 95 13 5 95 8.1.2 质谱参考条件 全国团体标准信息平台 48.1.2.1 电离方式：电喷雾离子源（ ESI），正离子模式。 8.1.2.2 监测方式：多反应离子监测（ MRM）。 8.1.2.3 其余参考条件见附录 B。 8.1.3 仪器调谐 不同厂家的仪器调谐参数存在一定差异 ，应按照仪器使用说明书在规定时间和频次内对 质谱进行仪器质量数和分辨率的校正，以确保仪器处于最佳质量状态。 8.2 校准 8.2.1 标准工作曲线的建立 8.2.1. 1取与污水等量自来水过膜， 并量取 50.0 mL加入 20 μL氘代内标标准使用液 （5.10.3），添加混合标准使用液（ 5.9.4），使其目标物（除可替宁） 浓度为 1 ng/L~500 ng/L，对应可替宁浓度为 10 ng/L~5000 ng/L，按照固相萃取及浓缩 （7.2.2）进行操作 ，得到 标准工作曲线提取液，待测。 8.2.1. 2按照仪器参考条件（ 8.1），由低浓度到高浓度依