中华人民共和国国家标准 GB5009.185—2016 食品安全国家标准 食品中展青霉素的测定 2016-12-23发布 2017-06-23实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局发布GB5009.185—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替GB/T5009.185—2003《苹果和山楂制品中展青霉素的测定》、NY/T1650—2008《苹果 及山楂制品中展青霉素的测定 高效液相色谱法》、SN/T2008—2007《进出口果汁中棒曲霉毒素的检 测方法 高效液相色谱法》和SN/T2534—2010《进出口水果和蔬菜制品中展青霉素含量检测方法 液相色谱-质谱/质谱法与高效液相色谱法》和SN/T1859—2007《饮料中棒曲霉素和5-羟甲基糠醛的测 定方法 液相色谱-质谱法和气相色谱-质谱法》中展青霉素部分。 本标准与GB/T5009.185—2003相比,主要变化如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中展青霉素的测定”; ———增加了同位素稀释-液相色谱-串联质谱法; ———增加了液相色谱法; ———扩大了适用范围; ———删除了薄层色谱法。GB5009.185—2016 1 食品安全国家标准 食品中展青霉素的测定 1 范围 本标准规定了食品中展青霉素的测定方法。 本标准第一法为同位素稀释-液相色谱串联质谱法,适用于苹果和山楂为原料的水果及其制品、果 蔬汁类和酒类食品中展青霉素含量的测定。 本标准第二法为高效液相色谱法,适用于苹果为原料的水果及其果蔬汁类和酒类食品中展青霉素 含量的测定。 第一法 同位素稀释-液相色谱-串联质谱法 2 原理 样品(浊汁、半流体及固体样品用果胶酶酶解处理)中的展青霉素经溶剂提取,展青霉素固相净化柱 或混合型阴离子交换柱净化、浓缩后,经反相液相色谱柱分离,电喷雾离子源离子化,多反应离子监测检 测,内标法定量。 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法使用的试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 乙腈(CH3CN):色谱纯。 3.1.2 甲醇(CH3OH):色谱纯。 3.1.3 乙酸(CH3COOH):色谱纯。 3.1.4 乙酸铵(CH3COONH4)。 3.1.5 果胶酶(液体):活性≥1500U/g,2℃~8℃避光保存。 3.2 试剂配制 3.2.1 乙酸溶液:取10mL乙酸加入250mL水,混匀。 3.2.2 乙酸铵溶液(5mmol/L):称取0.38g乙酸铵,加1000mL水溶解。 3.3 标准品 3.3.1 展青霉素标准品(C7H6O4,CAS号:149-29-1):纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质证书 的标准物质。 3.3.2 13C7-展青霉素同位素内标:25μg/mL,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。GB5009.185—2016 2 3.4 标准溶液配制 3.4.1 标准储备溶液(100μg/mL):用2mL乙腈溶解展青霉素标准品1.0mg后,移入10mL的容量 瓶,乙腈定容至刻度。溶液转移至试剂瓶中后,在-20℃下冷冻保存,备用,有效期6个月。展青霉素 标准溶液浓度的标定参见附录A。 3.4.2 标准工作液(1μg/mL):准确吸取100μL经标定过的展青霉素标准储备溶液至10mL容量瓶 中,用乙酸溶液定容至刻度。溶液转移至试剂瓶中后,在4℃下避光保存,有效期3个月。 3.4.3 13C7-展青霉素同位素内标工作液(1μg/mL):准确移取展青霉素同位素内标(25μg/mL) 0.40mL至10mL容量瓶中,用乙酸溶液定容。在4℃下避光保存,备用,3个月内有效。 3.4.4 标准系列工作溶液:分别准确移取标准工作液适量至10mL容量瓶中,加入500μL1.0μg/mL 的同位素内标工作液,用乙酸溶液定容至刻度,配制展青霉素浓度为5ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、 50ng/mL、100ng/mL、150ng/mL、200ng/mL、250ng/mL系列标准溶液。 4 仪器和设备 4.1 液相色谱-质谱联用仪:带电喷雾离子源。 4.2 匀浆机。 4.3 高速粉碎机。 4.4 组织捣碎机。 4.5 涡旋振荡器。 4.6 pH计:测量精度±0.02。 4.7 天平:感量为0.01g和0.00001g。 4.8 50mL具塞PVC离心管。 4.9 离心机:转速≥6000r/min。 4.10 展青霉素固相净化柱(以下简称净化柱):混合填料净化柱MycosepTM228或相当者。 4.11 混合型阴离子交换柱:N-乙烯吡咯烷酮-二乙烯基苯共聚物基质-CH2N(CH3)2C4H9+为填料的 固相萃取柱(6mL,150mg)或相当者。使用前分别用6mL甲醇和6mL水预淋洗并保持柱体湿润。 4.12 100mL梨形烧瓶。 4.13 固相萃取装置。 4.14 旋转蒸发仪。 4.15 氮吹仪。 5 分析步骤 5.1 试样制备 5.1.1 液体样品(苹果汁、山楂汁等) 样品倒入匀浆机中混匀,取其中任意的100g(或mL)样品进行检测。 酒类样品需超声脱气1h或4℃低温条件下存放过夜脱气。 5.1.2 固体样品(山楂片、果丹皮等) 样品用高速粉碎机将其粉碎,混合均匀后取样品100g用于检测。果丹皮等高黏度样品经液氮冻 干后立即用高速粉碎机将其粉碎,混合均匀后取样品100g用于检测。