中华人民共和国国家标准 GB5009.213—2016 食品安全国家标准 贝类中麻痹性贝类毒素的测定 2016-12-23发布 2017-06-23实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局发布GB5009.213—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替GB/T5009.213—2008《贝类中麻痹性贝类毒素的测定》、GB/T23215—2008《贝类中 多种麻痹性贝类毒素含量的测定 液相色谱-荧光检测法》、SC/T3023—2004《麻痹性贝类毒素的测定 生物法》、SN0352—1995《出口贝类麻痹性贝类毒素检验方法》、SN/T1735—2006《进出口贝类产品 中麻痹性贝类毒素检验方法 高效液相色谱法》和SN/T1773—2006《进出口贝类中麻痹性贝类毒素 检验方法 酶联免疫吸附试验法》。 本标准与GB/T5009.213—2008相比,主要变化如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准 贝类中麻痹性贝类毒素的测定”; ———增加了酶联免疫吸附法; ———增加了液相色谱-串联质谱法。GB5009.213—2016 1 食品安全国家标准 贝类中麻痹性贝类毒素的测定 1 范围 本标准规定了贝类中麻痹性贝类毒素测定的小鼠生物法,酶联免疫吸附方法,液相色谱法和液相色 谱-串联质谱法。 本标准适用于牡蛎、扇贝等贝类及其制品中麻痹性贝类毒素的检测。 小鼠生物法 2 原理 用盐酸提取贝类中麻痹性贝类毒素(PSP)。记录小鼠腹腔注射提取液后的死亡时间,根据麻痹性 贝类毒素致小鼠死亡时间与鼠单位关系的对照表查出鼠单位(MU),并按小鼠体重对鼠单位进行校正 得到校正鼠单位(CMU),计算得到每100g样品中PSP的鼠单位。以石房蛤毒素作为标准,将鼠单位 换算成毒素的微克数,计算每100g贝肉中的PSP微克数。测定结果代表存在于贝肉内各种化学结构 的PSP毒素总量。 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 氢氧化钠(NaOH)。 3.1.2 盐酸(HCl)。 3.1.3 无水乙醇(CH3CH2OH)。 3.2 试剂配制 3.2.1 氢氧化钠溶液(0.1mol/L):将4.0g氢氧化钠溶于1L水中。 3.2.2 盐酸溶液(0.18mol/L):将15.5mL盐酸用蒸馏水稀释至1L。 3.2.3 盐酸溶液(5mol/L):将45mL盐酸用水稀释至100mL。 3.2.4 酸性乙醇溶液:量取无水乙醇200mL,用水稀释至1000mL,混匀,用盐酸溶液(5mol/L)调节 pH至2.0~4.0。 3.3 标准品 石房蛤毒素标准品(STX,C10H17N7O4·2HCl,CAS号35554-08-6):纯度≥98.0%。 3.4 标准溶液的配制 3.4.1 石房蛤毒素标准储备液(100μg/mL):准确称取适量STX标准品,用酸性乙醇溶液溶解并定容,GB5009.213—2016 2 配制成STX的质量浓度为100μg/mL的标准储备液。 3.4.2 石房蛤毒素标准工作液(1μg/mL):准确吸取1mL石房蛤毒素标准储备液(100μg/mL),用水 稀释,用盐酸溶液(5mol/L)调节pH至2.0~4.0,用水定容至100mL。该标准工作液于0℃~4℃下 可保存30d。 3.5 材料 3.5.1 小鼠:体重为19g~21g的健康ICR系雄性小鼠。 3.5.2 pH计或pH试纸。 4 仪器和设备 4.1 均质器。 4.2 分析天平:感量为0.1g和0.0001g。 4.3 离心机:转速≥2000r/min。 5 分析步骤 注:为避免毒素的危害,应戴手套进行操作。移液管及移液器吸头等用过的器材、废弃的提取液等应在次氯酸钠溶 液(5%)中浸泡1h以上以使毒素分解。对于动物实验过程中产生的污水、废弃物及动物尸体处理,应参照 GB14925执行。 5.1 样品采集 从2kg以上样品中采取足够贝类个数,去壳使贝肉达200g以上。不能及时送检的新鲜贝类,开 壳将贝肉分离,将沥水后的200g贝肉放入200mL盐酸溶液(0.18mol/L)中,置4℃保存,备检。 5.2 试样制备 5.2.1 牡蛎、蛤及贻贝 用清水将贝类样品外表彻底洗净,切断闭壳肌,开壳,用蒸馏水淋洗内部去除泥沙及其他异物。将 闭壳肌和连接在胶合部的组织分开,仔细取出贝肉,切勿割破贝体。严禁加热或用麻醉剂开壳。收集约 200g贝肉分散置于筛子中沥水5min(不要使肉堆积),捡出碎壳等杂物,将贝肉均质备用。 5.2.2 扇贝 取可食部分用作检测,按5.2.1均质后备用。 5.2.3 冷冻贝类 在室温下,使冷冻的样品(带壳或脱壳的)自然融化,按5.2.1开壳、淋洗、取肉、均质、备用。 5.2.4 贝类罐头 将罐内所有内容物(肉及液体)充分均质。如果是大罐,将贝肉沥水并收集沥下的液体分别称重并 存放固形物和汤汁,将固形物和汤汁按原罐装比例混合,均质后备用。 5.2.5 用酸保存的贝肉 沥去酸液,分别存放贝肉及酸液,备用。