中华人民共和国国家标准 GB5009.247—2016 食品安全国家标准 食品中纽甜的测定 2016-08-31发布 2017-03-01实施 中华人民共和国 国家卫生和计划生育委员会发布GB5009.247—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替GB/T23378—2009《食品中纽甜的测定方法 高效液相色谱法》。 本标准与GB/T23378—2009相比,主要变化如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中纽甜的测定”。 ———适用范围更改为饮料、蜜饯、糕点、炒货、酱腌菜、糖果、果酱、果冻、复合调味料中纽甜的测定。GB5009.247—2016 1 食品安全国家标准 食品中纽甜的测定 1 范围 本标准规定了食品中纽甜含量的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于饮料、蜜饯、糕点、炒货、酱腌菜、糖果、果酱、果冻、复合调味料食品中纽甜的测定。 2 原理 试样经混合提取液提取,固相萃取柱净化后,采用高效液相色谱仪测定,保留时间定性,峰面积外标 法定量。 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 乙腈(CH3CN):色谱纯。 3.1.2 辛烷磺酸钠(C8H17NaO3S):色谱纯。 3.1.3 磷酸(H3PO4)。 3.1.4 甲酸(CH3COOH):色谱纯。 3.1.5 甲醇(CH3OH):色谱纯。 3.1.6 三乙胺(C6H15N):色谱纯。 3.2 试剂配制 3.2.1 混合提取液:分别吸取0.8mL甲酸和2.5mL三乙胺,加水定容至1000mL,pH约4.5。 3.2.2 离子对试剂缓冲液:称取2.00g辛烷磺酸钠,用500mL水溶解,加入1.0mL磷酸,加水定容至 1000mL。 3.3 标准品 纽甜(C20H30N2O5,CAS号:165450-17-9),纯度≥99.0%。 3.4 标准溶液配制 3.4.1 标准储备液:准确称取0.1000g纽甜标准品,加混合提取液溶解定容至100mL,此溶液纽甜含 量为1.00mg/mL。 3.4.2 标准工作液:分别吸取适量纽甜标准储备液,用混合提取液配制成浓度分别为0.2μg/mL、 1.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、50.0μg/mL、100.0μg/mL的系列标准工作液。 3.5 C18固相萃取柱:6mL、500mg,或相当者,使用前依次用5mL甲醇、10mL水活化。 3.6 0.45μm滤膜,有机系。GB5009.247—2016 2 4 仪器和设备 4.1 液相色谱仪,配有紫外检测器或二极管阵列检测器。 4.2 超声波清洗仪。 4.3 分析天平:感量0.0001g和0.01g。 4.4 组织捣碎机。 4.5 旋涡振荡器。 4.6 氮吹仪。 4.7 固相萃取装置。 4.8 离心机:转速≥4000r/min。 5 分析步骤 5.1 试样制备 5.1.1 固态样品 称取10g(精确到0.01g)粉碎均匀试样于50mL具塞塑料离心管中,加入30mL混合提取液,旋 涡振荡10min,超声30min后,用混合提取液定容至刻度,若溶液混浊,以不低于4000r/min离心 10min后,过滤待用。 5.1.2 液态样品 准确量取10.0mL试样于50mL具塞塑料离心管中,加入30mL混合提取液,振荡混匀。超声 15min后,用混合提取液定容至刻度,若溶液混浊,以不低于4000r/min离心10min后,过滤待用。 注:含气样品如碳酸饮料、汽水等先微温,搅拌去除试样中的二氧化碳或超声脱气后,再准确量取试样。 5.2 试样净化 吸取10.0mL的过滤液以1mL/min~2mL/min的流速通过固相萃取柱,待滤液完全流出后,用 5mL的混合提取液以1mL/min~2mL/min的流速淋洗萃取柱,弃去全部流出液,用5mL甲醇以 1mL/min的流速洗脱,洗脱液在40℃水浴中用氮吹仪浓缩,用混合提取液定容至2.0mL,经0.45μm 滤膜过滤后作为待测液供液相色谱仪分析。 5.3 仪器参考条件 5.3.1 色谱柱:C18色谱柱,5μm,250mm×4.6mm(内径)或相当者。 5.3.2 柱温:30℃。 5.3.3 流动相:A相:乙腈;B相:离子对试剂缓冲液。梯度洗脱程序见表1。 5.3.4 流速:1.0mL/min。 5.3.5 检测波长:218nm。 5.3.6 进样量:50μL。