中华人民共和国国家标准 GB5009.277—2016 食品安全国家标准 食品中双乙酸钠的测定 2016-12-23发布 2017-06-23实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局发布GB5009.277—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替GB/T23383—2009《食品中双乙酸钠的测定 高效液相色谱法》。 本标准与GB/T23383—2009相比,主要变化如下: ———标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中双乙酸钠的测定”; ———修改了标准的适用范围。GB5009.277—2016 1 食品安全国家标准 食品中双乙酸钠的测定 1 范围 本标准规定了食品中双乙酸钠的液相色谱测定方法。 本标准适用于豆干类、豆干再制品、原粮、粉圆、糕点、预制肉制品、熟肉制品、熟制水产品(可直接食 用)、固体复合调味料、膨化食品中双乙酸钠的测定。本标准不适用于调味品、液体复合调味料及添加过 乙酸的食品的测定。 2 原理 试样中双乙酸钠酸化后转化为乙酸,经超声波水浴提取或水蒸气蒸馏,收集后调pH,经高效液相 色谱测定,外标法定量。 3 试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,色谱用水为GB/T6682规定的一级水,其他用水为 GB/T6682规定的三级水。 3.1 试剂 3.1.1 磷酸(H3PO4)。 3.1.2 磷酸氢二铵[(NH4)2HPO4]。 3.1.3 硅油[(C2H6OSi)n]。 3.2 试剂配制 3.2.1 磷酸溶液(1mol/L):在500mL水中加入53.5mL磷酸,混匀后加水定容至1000mL。 3.2.2 磷酸氢二铵溶液(1.5g/L):称取磷酸氢二铵1.5g,加水溶解定容至1000mL。 3.3 标准品 双乙酸钠标准品[(CH3COO)2HNa,CAS号:126-96-5]:纯度≥99%。 3.4 标准溶液配制 3.4.1 标准储备液(10mg/mL):准确称取双乙酸钠标准品1g(精确至0.0001g),用水定容至 100mL。该标准储备液置于0℃~4℃冰箱内保存,保存期为3个月。 3.4.2 标准工作液:准确吸取5.0mL标准储备液于50mL容量瓶中,用水稀释至刻度,配制成浓度为 1.0mg/mL标准工作液。该标准工作液置于0℃~4℃冰箱内保存,保存期为1个月。 4 仪器和设备 4.1 高效液相色谱(HPLC)仪:配有紫外检测器或二极管阵列检测器。GB5009.277—2016 2 4.2 分析天平:感量为0.0001g和0.01g。 4.3 组织捣碎机。 4.4 水蒸气蒸馏装置:500mL。 4.5 离心机:转速≥4000r/min。 4.6 具塞塑料离心管:50mL。 4.7 超声波清洗器。 4.8 pH计。 4.9 0.45μm水相微孔滤膜。 4.10 精密pH试纸:pH0.5~5.0。 5 分析步骤 5.1 试样制备 固体样品取500g,经组织捣碎机捣碎混匀后备用;液体样品摇匀后备用。 5.2 试样处理 5.2.1 蒸馏法 准确称取25g(精确至0.01g)试样,置于500mL蒸馏瓶中,加入100mL水,再用50mL水冲洗容 器,转移到蒸馏瓶中,加磷酸溶液(1mol/L)20mL,2滴~3滴硅油,进行水蒸气蒸馏,将250mL容量 瓶置于冰浴中作为吸收液接收装置,待蒸馏约240mL时取出,在室温下放置30min,用1mol/L磷酸 溶液调pH为3左右,加水定容,摇匀,经0.45μm水相微孔滤膜过滤后,供液相色谱测定。 5.2.2 直接浸提法(仅适用于馒头、花卷) 准确称取5g(精确至0.01g)试样至100mL烧杯中,加水20mL,加入1mol/L磷酸溶液0.5mL, 混匀,经超声浸提10min后,用磷酸溶液(1mol/L)调pH为3左右,转移试样至50mL容量瓶中,用水 定容至刻度,摇匀。将试样全部转移至50mL具塞塑料离心管中,以不低于4000r/min离心10min, 取上清液,经0.45μm水相微孔滤膜过滤后,供液相色谱测定。 5.3 仪器参考条件 a) 色谱柱:C18柱,柱长250mm,内径4.6mm,粒径5μm,或等效色谱柱; b)柱温:25℃; c)流动相:用磷酸溶液(1mol/L)调节磷酸氢二铵溶液(1.5g/L)pH为2.7~3.5(临用现配),经 0.45μm水相微孔滤膜过滤; d)流速:1.0mL/min; e)波长:214nm; f) 进样量:20μL; g) 色谱柱清洗参考条件:试验结束后,用10%甲醇清洗1h,再用100%甲醇清洗1h。 5.4 标准曲线的制作 5.4.1 蒸馏法 准确吸取双乙酸钠标准储备液1.0mL、2.5mL、5.0mL、7.5mL、10.0mL、12.5mL置于500mL