ICS 65.150 B 51 中华人民共和国国家标准 GB/T 35896—2018 脊尾白虾 Ridge tail shrimp 2018-09-01实施 2018-02-06发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 35896—2018 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国水产标准化技术委员会海水养殖分技术委员会（SAC/TC156/SC2)归口。 本标准起草单位：中国水产科学研究院黄海水产研究所 本标准主要起草人：李健、刘萍、李吉涛、段亚飞。 GB/T358962018 脊尾白虾 1范围 本标准给出了脊尾白虾（EropalaemoncarinicaudaHolthuis，195o）的学名与分类，主要外部形态 特征、生长与繁殖特性、细胞遗传学特性、生化遗传学特性、分子遗传学特性、检测方法及判定规则 本标准适用于脊尾白虾的种质鉴定和检测 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 GB/T18654.2养殖鱼类种质检验第2部分：抽样方法 GB/T19782中国对虾 SC/T1102虾类性状测定 3 学名与分类 3.1学名 脊尾白虾（EropalaemoncarinicaudaHolthuis，l95o）。 3.2分类位置 甲壳纲（Crustacea），十足目（Decapoda），长臂虾科（Palaemonidae），白虾属（Eropalaemon）。 主要外部形态特征 4. 4.1 外部特征 脊尾白虾额角侧扁细长，上下缘均具锯齿。腹部第3节至第6节背面中央有一明显的纵脊。第二 步足的腕节和指节长度约相等，但长于掌节。体色透明，微带蓝色或红色小斑点，腹部各节后缘颜色较 深。雌雄异体，雄性第二腹肢肢内缘有一细长带瓢的棒状突起，称雄性附肢，雌性具开放式纳精囊。抱 卵期间雌虾第15腹节两侧各有蓝色圆斑。尾节未端尖细，呈刺状。脊尾白虾的外部形态见图1。 1 GB/T35896—2018 a）脊尾白虾外部形态图 b）脊尾白虾尾棘外部形态图 图1 脊尾白虾形态图 4.2可数性状 额角齿式：上额角齿数/下额角齿数为6~9/3~6。 4.3可量性状 4.3.1额角基部1/3具鸡冠状隆起，额角长度约为头胸甲的1.2倍1.5倍。 4.3.2尾节两侧有2对微小的棘刺。 4.3.3第一触角上鞭分为2枝，内侧枝短，为头胸甲长的1/3。 5生长与繁殖特性 5.1生长 脊尾白虾为中型虾类，成体体长5cm～9cm，体长与体重之间的指数关系方程： W=1.026X10-5L3.08 (r=0.995) 5.2繁殖 5.2.1生物学最小型 性成熟最小个体体长4.4cm，抱卵个体最小体长4.9cm。 5.2.2繁殖期 当水温达12℃～13℃时，成熟亲虾即蜕壳、交配、产卵。雌虾在繁殖期内可以进行2次～3次产 卵，再次产卵的时间间隔为产卵后30天左右。一般2次以上产卵后自然死亡。3月～11月自然海区都 能捕到怀卵亲体。脊尾白虾养殖群体的繁殖盛期为4月～6月和8月～9月。 5.2.3卵的特性 具抱卵特性，雌虾抱卵量一般在600粒/尾～1500粒/尾之间。卵径（0.5mm～0.7mm）× （0.7mm～0.9mm），椭圆形，粘在腹部游泳足上受精卵开始为桔黄色，逐渐变为桔红色至红棕色，最后 变成灰黑色。 2 GB/T35896—2018 6 6细胞遗传学特性 染色体数目为2n=90。 生化遗传学特性 肌肉中谷氨酸脱氢酶（GDH)电泳图谱见图2。 (uh-1 图2脊尾白虾谷氨酸脱氢酶（GDH)电泳图谱 3分子遗传学特性 8 对线粒体16SrRNA基因片段进行扩增和测序，获得长度为509bp核苷酸序列，种内个体间遗传 距离小于2%，片段序列如下： 1 GGCTGTGTGGTTTATTAGTATAGAGTCTAGCCTGCCCACTGAGTTTTTAAAGGGCTGCGG 60 61 TAATTTGACCGTGCAAAGGTAGCATAATCAATAGTCTTTTAATTGAAGGCTTGAATGAAC 120 121 GGCTGGATAAAAGAGAAGCTGTCTTTTTTTCAAGTTAGAATTTGACTTTTAAGTGAAAAG 180 181 GCTTAAATTAACTAAGGGGACGATAAGACCCTATAAAACTTAATAAAAGGTTAATTTTAA 240 241 CTATGAATTGTATTTAAAAGTTGTGAAATTCTCTTTTTATTTTGTTGGGGCGACATTGAT 300 301 ATAAGCTGTAACTGTCTTGATAATAAAATAGTTATCACTATAAGCTGATCCTTTTTTAGG 360 361 GATAATAAGTATAAGTTACTTTAGGGATAACAGCGTAATTTTTTCTGAGAGTTCTTATCG 420 421 AAGAAAGTAGTTGCGACCTCGATGTTGAATTAAAATTTCATGCAGGTGTAGCCGCTTGCC 480 481 GTGTGGGTCTGTTCGACCTTTAAAATTTT 509 9 检测方法 9.1 抽样方法 按GB/T18654.2执行。 9.2 形态测量 按SC/T1102的规定执行。 9.3 繁殖特性检测 抱卵雌虾测量形态性状后，活体剥离腹部所抱受精卵，进行计数，测量30尾抱卵雌虾所抱受精卵数 量后，取平均值；受精卵卵径采取解剖镜下目微尺测量，测量30尾个体，每尾个体测量50个，取平均值， 9.4染色体的检测 按GB/T19782的规定执行。 3. GB/T35896—2018 9.5同工酶检测 9.5.1样品制备 虾活体运到实验室，肌肉放人液氮中。取出样品，加入5倍体积的0.1mol/L磷酸缓冲液（PBS)后 冰浴匀浆，4℃离心（15000r/min，10min），取上清液加入少量1%漠酚兰，再加人等体积的40%蔗糖 溶液，一20℃保存待测。 9.5.2电泳 同工酶电泳采用不连续聚内烯酰胺凝胶垂直电泳。电泳在4℃冰箱中进行。电泳参数如下： 凝胶浓度（T）：T浓缩胶=3.6%（pH6.7），T分离胶=8.2%（pH8.9）；电压：Tris-甘氨酸（TG，pH8.3） 系统，恒压230V；电泳时间4h。 谷氨酸脱氢酶（GDH)染色液配方如附录A所示。 9.6mtDNA16SrRNA序列分析 9.6.1DNA提取 每尾个体取约100mg腹部肌肉，剪碎组织，加人475μL组织匀浆缓冲液（10mmol/LTris-HCl， pH=8.0；50mmol/LEDTA，pH=8.0），充分混匀，依次加人终浓度为10%的SDS和20μg/mL的蛋 白酶K，55℃裂解至澄清，用酚、酚：氯仿（1：1）和氯仿各抽提1次。用DNA定量仪测定样品DNA 的浓度和纯度，1%琼脂糖凝胶电泳检测，全自动凝胶成像系统拍照，一20℃保存备用。 9.6.2线粒体16SrRNA基因片段的扩增 引物:16S AR:5'-CGCCTGTTTATCAAAAACAT-3',16S BR:5'-CCGGTCTGAACTCAGAT- CACG -3'。 PCR反应条件：94℃预变性2min，94℃变性45s，48℃退火1min，72℃延伸1min35个循环； 72℃延伸5min。PCR反应总体积体系为25μL，10×PCRbuffer2.5μL，dNTPs0.2mmol/L，MgCl 2mmol/L,Taq酶1U。引物各0.12μmol/L,模板DNA50 ng~100 ng。 PCR扩增产物经1.0%琼脂糖凝胶检测，电泳缓冲液为1XTBE（pH8.0），电压为4V/cm， Genefinder染色，于凝胶成像系统下观察并拍照记录。 9.6.3DNA序列测定 将PCR产物纯化后双向测序。 10判定规则 检测结果不符合第4章、第6章任意一条要求的，则判定为不合格项；有不合格项的样品为不合格 样品。 4 GB/T 35896—2018 附录A （规范性附录） 谷氨酸脱氢酶（GDH)染液配制方法 谷氨酸脱氢酶（GDH)染液配制方法如表A.1所示。 表 A.1 谷氨酸脱氢酶（GDH)染液配制方法 酶 英文及缩写 药品 浓度 剂量 PBS 0.5 mol/L pH 7.0 12.5mL Sodium L glutamate Glutamate 1 mol/L pH 7.0 5 mL 谷氨酸脱氢酶 dehydrogenase, NAD 5mg/mL 5 mL GDH NBT 5 mg/mL 5 mL PMS 5mg/mL 5 mL 5