ICS 71.100.70 Y 42 中华人民共和国国家标准 GB/T 35916—2018 化妆品中16种准用防晒剂和其他8种 紫外线吸收物质的测定 高效液相色谱法 Simultaneous determination of 16 kinds of permitted sunscreen agents and other 8 kinds of ultraviolet absorbents in cosmeticsHPLC 2018-09-01实施 2018-02-06发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T35916—2018 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出 本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会（SAC/TC257）归口。 本标准起草单位：大连市食品检验所、大连市产品质量检测研究院、上海市日用化学工业研究所。 本标准主要起草人：毛希琴、曲宝成、边海涛、任国杰、戴学东、李鹏、勇艳华、胡侠、董广彬、沈敏、 康薇。 GB/T35916—2018 引 本标准的被测物质苯基苯并咪唑磺酸、二苯酮-4、二苯酮-5、二苯酮-3、P-甲氧基肉桂酸异戊酯、4-甲 基苄亚基樟脑、二乙氨羟苯甲酰基苯甲酸已酯、奥克利林、PABA乙基已酯、丁基甲氧基二苯甲酰基甲 烷、甲氧基肉桂酸乙基己酯、水杨酸乙基已酯、胡莫柳酯、乙基己基三嗪酮、亚甲基双-苯并三唑基四甲基 丁基酚、双-乙基已氧苯酚甲氧苯基三嗪等16种化合物是《化妆品安全技术规范（2015版）》规定的化妆 品准用防晒剂。 Ⅱ GB/T 35916—2018 化妆品中16种准用防晒剂和其他8种 紫外线吸收物质的测定 高效液相色谱法 范围 本标准规定了化妆品中16种准用防晒剂和其他8种紫外线吸收物质（见表1）的高效液相色谱测 定方法。 本标准适用于膏霜类、乳液类、水剂类、唇膏等蜡基类、指甲油类、粉类等化妆品 本标准化妆品中16种准用防晒剂和其他8种紫外线吸收物质的检出限、定量限参见表1。 表 1 方法的检出限和定量限 检出限 定量限 序号 中文名称 mg/g mg/g 1 对氨基苯甲酸(PABA) 0.17 0.50 2 苯基苯并咪唑磺酸（PBSA) 0.105 0.30 3 二苯酮-4和二苯酮-5(Bp4/Bp5) 0.030 0.10 4 二苯酮-2（Bp2) 0.015 0.045 5 二苯酮-1(Bp1) 0.015 0.045 6 二苯酮-8(Bp8) 0.015 0.045 7 二苯酮-6(Bp6) 0.020 0.060 8 二苯酮-3（Bp3) 0.030 0.10 9 二苯酮-7(Bp7) 0.10 0.30 10 二苯酮-10(Bp10) 0.015 0.045 11 p-甲氧基肉桂酸异戊酯(IAMC) 0.030 0.10 12 4-甲基苄亚基樟脑(4MBC) 0.030 0.10 13 二乙氨羟苯甲酰基苯甲酸己酯（DHHB) 0.030 0.10 14 奥克利林（OC) 0.10 0.30 15 PABA乙基己酯（OD-PABA) 0.030 0.10 16 丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷（BMDBM） 0.030 0.10 17 甲氧基肉桂酸乙基己酯（EHMC) 0.030 0,10 18 水杨酸乙基已酯（EHS) 0.10 0.30 19 胡莫柳酯(HMS) 0.10 0.30 20 二苯酮-12(Bp12) 0.030 0.10 21 乙基己基三嗪酮(EHT) 0.030 0.10 22 亚甲基双-苯并三唑基四甲基丁基酚（MBBT） 0.030 0.10 23 双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪（BEMT） 0.030 0.10 1 GB/T35916—2018 2原理 样品经过提取后，用高效液相色谱法测定。以目标物的色谱保留时间和紫外光谱图与标准物质 一 致进行定性，以色谱峰的峰面积用标准曲线外标法进行定量计算。必要时，采用高效液相色谱-质谱方 法（HPLC-MS/MS)进行确证。 3试剂和材料 除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为去离子水。 3.1标准物质中文名称、英文名称、CAS号、分子式、分子结构式、相对分子质量、纯度参见附录A中表A.1。 3.2 甲醇：色谱纯。 3.3甲酸：色谱纯。 3.4 乙醇：色谱纯。 3.5 四氢呋喃：色谱纯。 氨水：色谱纯。 3.6 3.7 四氢呋喃。 3.8甲醇。 3.9 氨水。 3.101%氨水氨化甲醇溶液：1mL氨水（3.6)与99mL甲醇（3.2)混合。 3.11 四氢味喃溶液（含0.1%氨水）：向100mL四氢味喃（3.7）中加入100μL氨水（3.9）制得 3.12甲醇水溶液（含0.1%氨水）：甲醇（3.8）和水按照3+1（体积比）混合，取100mL混合溶液加入 100μL氨水（3.9）制得。 3.13标准储备溶液：分别准确称取各标准物质100mg（精确至0.1mg）于棕色容量瓶中，苯基苯并咪 唑磺酸用1%氨水氨化甲醇溶液（3.10）溶解后定容至10mL，其他均用四氢呋喃（3.5）溶解后定容至 10mL，配置成浓度为10mg/mL的标准储备液于冷藏条件下保存，保存期限为6个月。 3.14标准溶液的配制：准确移取标准储备液（3.13）各200uL，用甲醇（3.2）定容至10mL，配置成 200μg/mL的混合标准溶液，再用甲醇（3.2）逐级稀释配置100μg/mL，50μg/mL，10μg/mL， 5μg/mL，1ug/mL的系列混合标准溶液，用于高效液相色谱法的标准曲线的绘制。系列标准溶液于冷 藏条件下的保存期限为1个月。 注：对冷冻保存的标准储备液，使用前需放置至室温，若有析出需超声至析出重新复溶方可使用， 3.150.22μm聚丙烯微孔滤膜针式过滤器（或其他性能相同的有机滤膜）。 4仪器 SAG 4.1高效液相色谱仪配置二极管阵列检测器。 4.2高效液相色谱串联四级杆质谱仪配置ESI离子源（确证时使用）。 4.3分析天平：感量0.0001g。 4.4分析天平：感量0.00001g。 4.5漩涡混合器。 4.6超声波清洗仪。 4.77 离心机：转速不小于5000r/min。 4.8 移液枪或移液器。 2 GB/T 35916—2018 5 测定步骤 5.1 样品预处理 称取约0.1g化妆品样品（精确至1mg）于15mL具塞刻度试管中（使用时应混匀的化妆品，取样 时也应混匀后称量），首先向试管中加入6mL四氢呋哺溶液（含0.1%氨水）（3.11），涡旋或超声使样品 完全分散。若不能分散，超声5min～15min至样品分散。对超声15min仍无法分散的样品（例如唇 膏样品），需用60℃水浴，振荡加热约1min～2min即可溶解分散。继续向试管中加入甲醇水溶液（含 0.1%氨水）（3.12）定容至10mL，涡旋混合。于5000r/min离心5min~10min，取清液，经0.22μm 聚丙烯微孔滤膜（或其他性能相同的有机滤膜）（3.15）过滤，待用。 注：因不同滤膜材料会对个别目标化合物有吸附作用从而影响其收率，建议使用前用混合标准溶液进行过膜测试， 确证滤膜对所有目标物无吸附后方可使用。 稀释至1mL，用聚内烯微孔滤膜过滤后上机测试。其他目标化合物的检测视情况可适当稀释后上机测 试，也可无需稀释，将上述待用清液直接上机测试。 5.2 液相色谱分析参考条件 液相色谱分析参考条件如下： SAC a） 色谱柱：PoreshellEC-Cis，3.0mmX50mm,2.7μm或性能相当者； b) 柱温：35℃； c) 流动相：A水溶液（含0.1%甲酸），B乙醇：甲醇=1：3（体积比）； d) 流速：1.0mL/min; e) 他目标物311nm； 进样量：5uL。液相色谱分离条件见表2。 f) 注：当测定目标物为对氨基苯甲酸、苯基苯并咪唑磺酸时，进样量减少为2μL，可有效避免色谱峰的溶剂效应，但注 意计算时需要折算。 表 2 液相色谱分离条件 时间/min A/% B/% 0 06 10 1 80 20 2 48 52 5 32 68 5.1 25 75 10 25 75 10.5 0 100 14 0 100 14.1 90 10 10 15 06 注1：若上述液相色谱条件下丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷(BMDBM)（峰号16)与甲氧基肉桂酸乙基已酯（EHMC) （峰号17)分离度不满意，可将5.1min~10min的75%有机相比例降低至73%并适当延长分离时间。 注2：色谱柱的内径和长度及色谱填料粒径可根据色谱分离情况自由选择。 3 GB/T35916—2018 5.3 定性分析 将在相同的液相色谱条件下获得的样品溶液的液相色谱分离谱图与标准物质的液相色谱分离谱图 进行比较，若样品谱图中存在保留时间与某标准物质的保留时间一致的色谱峰，并且其扣除背景后的紫 外吸收图谱与该标准物质的紫外吸收图谱一致，则可确认样品中存在该物质。标准物质液相色谱分离 谱图参见附录B中图B.1。必要时，阳性样品需用高效液相色谱-质谱方法（HPLC-MS/MS)进行确证， 确证试验参见附录C。 5.4定量测定 移取系列标准溶液（3.14），按照液相色谱条件（5.2）进行高效液相色谱分析，以系列标准溶液质量 浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，制作标准曲线。样品溶液中目标物的含量，用标准曲线外标法确定。 待测溶液中目标物的质量浓度应在校准曲线线性范围内，超过线性范围则应适当稀释后再进样分析。 5.5 5结果计算 样品中目标物的含量按式（1)计算： X_CXV X10-3 ....(1) m