ICS 67.050 X 04 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T30636—2014 燕窝及其制品中睡液酸的测定 液相色谱法 Determination of sialic acid in swiflets nest and swiflets nest products- Liquid chromatographic method 2014-12-31发布 2015-05-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T30636—2014 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由全国食品工业标准化技术委员会（SAC/TC64）提出。 本标准由全国食品工业标准化技术委员会食品通用检测技术分技术委员会（SAC/TC64/SC8) 归口。 本标准起草单位：国家农业深加工产品质量监督检验中心、吉林省产品质量监督检验院， 本标准主要起草人：李刚、刘俊会、李界一、华蕾、李媛媛、干伟、干莹、史艳宇、安伟、干庆蜂、李丹 李宁。 I GB/T30636—2014 燕窝及其制品中睡液酸的测定 液相色谱法 1 范围 本标准规定了液相色谱法测定燕窝及其制品中唾液酸的方法。 本标准适用于燕窝及其制品中睡液酸的测定。 本标准的方法检出限：燕窝为0.3g/kg，燕窝制品为0.003g/kg。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 燕窝及燕窝制品在乙酸溶液中加热水解，释放出睡液酸，水解液用强阳离子交换柱分离，液相色谱 紫外检测器检测，外标法定量。 4试剂及材料 4.1 水：符合GB/T6682规定的一级水要求。 乙：色谱纯。 4.3 冰乙酸：分析纯。 4.4 磷酸：分析纯。 4.5 唾液酸（N-乙酰神经氨酸，CiHiNO）：纯度大于99%。 4.6 聚乙二醇：平均相对分子质量不低于17000。 4.7 0.1%磷酸溶液：取1mL磷酸，加水定容至1000mL，混匀后用0.45μm微孔滤膜过滤。 4.8 50%乙酸溶液：取100mL冰乙酸，加水100mL混匀。 4.9 10%聚乙二醇溶液：称取50g聚乙二醇，加水500mL搅拌溶解。 4.10 ）睡液酸标准储备溶液（1.00mg/mL）：称取唾液酸100.0mg，加水20mL溶解后，加乙腈定容至 100mL。4℃条件下避光保存，保存期一个月。 4.11透析袋：可透过相对分子质量10000以下的化合物，临用前用水浸泡1h。 4.12 0.45μm微孔滤膜：有机相。 4.13 0.45um针筒式过滤器：有机相。 1 GB/T30636—2014 4.14流动相：取0.1%磷酸溶液100mL，加乙睛定容至1000mL，混匀后用0.45um有机相微孔滤膜 过滤。 5仪器 5.1 液相色谱仪：带紫外检测器。 5.2 恒温水浴锅。 5.3石 研钵。 5.4 匀浆机：转速10000r/min。 5.5 烘箱。 5.6 分析天平：感量0.1mg。 5.7 具塞比色管：25mL，带刻度 6分析步骤 6.1试样处理 6.1.1干燕窝 取适量试样于105℃烘干60min，干燥器中冷却，用研钵研成细粉，混匀。准确称取试样0.1g（精 确至0.0001g），置于25mL比色管中，加人50%乙酸溶液10mL，盖上玻璃塞，置于100℃水浴中水解 10min，取出比色管，冷却至室温。将水解液转移至100mL容量瓶中，用流动相定容至刻度，混匀，取 上清液用0.45um针筒式过滤器过滤，待测。 6.1.2冰糖燕窝制品 取适量试样于烧杯中，以转速10000r/min匀浆3min，静置至泡沫消除，准确称取试样10g（精确 至0.01g），置于透析袋中（试样体积不超过透析袋容积的20%），扎紧透析袋两端，置于1000mL烧杯 中在流水下透析24h。透析后，将此透析袋浸泡于10%聚乙二醇溶液中使水分渗出，至袋中试液体积 小于5mL，将试液转移至25mL比色管中，加少量水冲洗透析袋，合并至比色管中，加等体积冰乙酸， 使水解液中乙酸浓度为50%。用玻璃塞塞好比色管，置于100℃水浴中水解10min，取出比色管冷却 至室温。将水解液转移至100mL容量瓶中，用流动相定容至刻度，混匀，取上清液用0.45μm针筒式 过滤器过滤，待测。 6.2睡液酸系列标准工作溶液配制 分别量取睡液酸标准储备液1.00mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL.8.00mL10.0mL，置于100ml 容量瓶中，加流动相定容至刻度，配制成睡液酸浓度为10.0μg/mL、20.0μg/mL、40.0μg/mL、60.0μg/mL、 80.0μg/mL、100.0μg/mL的睡液酸标准溶液，待测。 7测定 7.1色谱参考条件 7.1.1色谱柱：300SCX阳离子交换色谱柱，4.6mm×250mm，粒径5μm，或相当者。 2 GB/T30636—2014 7.1.2流动相：乙睛-0.1%磷酸水溶液（90十10，体积比）。 7.1.3柱温：30℃。 7.1.4流速：1.0mL/min。 7.1.5进样量：10μL。 7.1.6检测波长：205nm。 7.2 液相色谱测定 取睡液酸系列标准溶液和试液分别进样，以标准系列溶液峰面积为纵坐标、浓度为横坐标作图，绘 制标准曲线。以保留时间定性，峰面积外标法定量。唾液酸标准溶液及燕窝试样水解液色谱图参见附 录A。 8结果计算 测定结果可由仪器工作站自动计算，也可按式（1）计算： c×VX103 X = ..(1) m×106 式中： X一试液中唾液酸的含量，单位为克每千克（g/kg）； 由标准曲线查得试液中唾液酸的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； V——试液定容体积，单位为毫升（mL）； m——试样取样质量，单位为克（g）。 计算结果保留两位有效数字。 9精密度 9.1一般规定 本标准的精密度按照GB/T6379.2的规定确定，重复性和再现性的值以95%的可信度来计算。 9.2重复性 在重复性条件下，获得两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限（r）。不同试样的含量范围 及重复性方程见表1。 表1 燕窝及其制品睡液酸含量范围及重复性和再现性方程 试样名称 含量范围/（g/kg） 重复性限(r) 再现性限(R) 干燕窝 0.6~60.4 r=0.0067+0.0357m R=0.0184+0.0356m 燕窝制品 0.006~0.560 r=0.0387m r=0.038 7m 注：m表示两次测定结果的算术平均值，单位为克每千克（g/kg）。 3