ICS 65.120 B 25 DB41 河 南 省 地 方 标 准 DB41/T 1906—2019 苜蓿青贮料质量分级 2019 - 09 - 30 发布 河南省市场监督管理局 2019 - 12 - 30 实施 发 布 DB41/T 1906—2019 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 ............................................................................... 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... 1 3 术语和定义 ......................................................................... 1 4 质量分级 ........................................................................... 1 5 要求 ............................................................................... 2 6 检验方法 ........................................................................... 2 附录 A（资料性附录）比色法测定苜蓿青贮料氨态氮含量 .................................... 4 附录 B（资料性附录）高效液相色谱法测定苜蓿青贮料有机酸含量 ............................ 6 I DB41/T 1906—2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由河南省农业农村厅提出并归口。 本标准起草单位：河南农业大学、河南省饲草饲料站。 本标准主要起草人：朱晓艳、牛岩、史莹华、郑爱荣、王成章、王彦华、张晓霞、李德锋、王红艺、王 璟、黄晓燕。 II DB41/T 1906—2019 苜蓿青贮料质量分级 1 范围 本标准规定了苜蓿青贮料的术语和定义、质量分级、要求和检验方法。 本标准适用于以苜蓿为原料调制的青贮饲料。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6432 饲料中粗蛋白的测定 凯氏定氮法 GB/T 6435 饲料中水分的测定 GB/T 6438 饲料中粗灰分的测定 GB/T 10468 水果和蔬菜产品pH值的测定方法 GB 13078 饲料卫生标准 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 GB/T 20806 饲料中中性洗涤纤维（NDF）的测定 NY/T 1459 饲料中酸性洗涤纤维的测定 NY/T 2129 饲草产品抽样技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 苜蓿青贮料 将刈割、晾晒至含水量60%～70%的青绿苜蓿切短后置于密封的青贮容器中，经乳酸菌厌氧发酵产生 乳酸后抑制有害微生物生长，使青绿苜蓿可以长期保存的多汁饲料产品。 4 质量分级 苜蓿青贮料质量分级应符合表1的规定。 表1 苜蓿青贮料质量分级 等级 项目 一级 二级 三级 四级 pH 值 ≤4.3 ＞4.3，≤4.6 ＞4.6，≤4.8 ＞4.8，≤5.2 氨态氮/总氮，% ≤10.0 ＞10.0，≤15.0 ＞15.0，≤20.0 ＞20.0，≤30.0 乳酸，% ≥75.0 ＜75.0，≥60.0 ＜60.0，≥50.0 ＜50.0，≥40.0 1 DB41/T 1906—2019 表 1（续） 等级 项目 一级 二级 三级 四级 乙酸，% ≤20.0 ＞20.0，≤30.0 ＞30.0，≤40.0 ＞40.0，≤50.0 丁酸，% 0.0 ≤2.0 ＞2.0，≤10.0 ＞10.0 粗蛋白质，% ≥20.0 ＜20.0，≥18.0 ＜18.0，≥16.0 ＜16.0，≥15.0 中性洗涤纤维，% ≤35.0 ＞35.0，≤40.0 ＞40.0，≤44.0 ＞44.0，≤45.0 酸性洗涤纤维，% ≤30.0 ＞30.0，≤33.0 ＞33.0，≤36.0 ＞36.0，≤37.0 注：粗蛋白质、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维以占干物质的量表示；乳酸、乙酸、丁酸数值以占有机酸的总量表 示，有机酸为乳酸、乙酸、丁酸、丙酸的总和构成。 5 要求 5.1 感官 5.1.1 颜色 绿色、黄绿色、暗绿色或黄褐色，无褐色或黑色。 5.1.2 气味 酸香味或稍有酒精、醋酸味，无霉味、腐臭味或氨味。 5.1.3 质地 茎叶结构清晰或基本保持原状，松散，柔软湿润，无茎叶模糊、腐烂、黏滑或干硬。 5.2 干物质 苜蓿青贮原料干物质含量为30%～40%。 5.3 粗灰分 苜蓿青贮原料粗灰分含量低于12%。 5.4 青贮料卫生 应符合GB 13078的规定。 6 检验方法 6.1 感官 在自然光下视物最清楚的距离内目测苜蓿青贮料的色泽、结构；青贮料常态下，贴近鼻尖嗅闻气味； 用手指捻，通过触觉评价质地。 6.2 抽样 按NY/T 2129的规定执行。 2 DB41/T 1906—2019 6.3 试样制备 6.3.1 常规指标 按GB/T 20195的规定执行。 6.3.2 浸提液 取具代表性苜蓿青贮料样品20 g，置于组织捣碎机（或家用榨汁机）中，加入去离子水180 mL，搅 拌1 min，用四层纱布和滤纸过滤，得到试样浸提液。 6.4 pH 值 将制备的试样浸提液，按GB/T 10468的规定执行。 6.5 氨态氮 将制备的试样浸提液，按附录A的规定执行。 6.6 乳酸、乙酸、丁酸 将制备的试样浸提液，按附录B的规定执行。 6.7 粗蛋白质 按GB/T 6432的规定执行。 6.8 中性洗涤纤维 按GB/T 20806的规定执行。 6.9 酸性洗涤纤维 按NY/T 1459的规定执行。 6.10 干物质 按GB/T 6345的规定执行。 6.11 粗灰分 按GB/T 6438的规定执行。 3 DB41/T 1906—2019 附 录 A （资料性附录） 比色法测定苜蓿青贮料氨态氮含量 A.1 试剂 A.1.1 苯酚显色剂 将0.15 g亚硝基铁氰化钠（Na2[Fe(CN)5·NO]2H2O）溶解在1.5 L蒸馏水中，再加入29.7 g结晶苯酚， 定容至3 L，于棕色玻璃瓶中避光贮存。 A.1.2 次氯酸钠试剂 将15 g氢氧化钠（NaOH）溶解在2 L蒸馏水中，再加入113.6 g磷酸氢二钠（Na2HPO6·7H2O），中火 加热并不断搅拌至完全溶解。冷却后加入44.1 mL含8.5%活性氯的次氯酸钠（NaClO）溶液，混匀，定容 至3 L，于棕色玻璃瓶中避光贮存。 A.1.3 标准铵储备液 准确称取0.6607 g经100 ℃烘干24 h的硫酸铵（[(NH4)2SO4]）溶于适量蒸馏水中，并定容至100 mL， 配制成100 mmol/L的标准铵储备液。将上述储备液稀释配制成1.0 mol/L、2.0 mol/L、3.0 mol/L、4.0 mol/L、5.0 mol/L五种不同浓度梯度的标准液。 A.2 仪器与设备 A.2.1 A.2.2 A.2.3 A.2.4 A.2.5 A.2.6 分光光度计：630 nm，1 cm玻璃比色皿。 天平：万分之一。 恒温水浴锅。 移液器：50 μ L。 移液管：2 mL，5 mL，50 mL。 玻璃器皿：试管，所需器皿用稀盐酸浸泡，依次用自来水、蒸馏水洗净。 A.3 测定步骤 A.3.1 标准曲线建立 取不同浓度梯度的标准液各50 μL至做好标记的试管中，空白为50 μL蒸馏水，依次加入2.5 mL苯 酚显色剂、2.0 mL次氯酸钠试剂，摇匀，95 ℃水浴中显色5 min。冷却后，630 nm波长下比色。以吸光 度和标准液浓度为坐标轴建立标准曲线。 A.3.2 样品测定 向每支试管中加入50 μL正文中所述制备青贮浸出液，按检测步骤测定样本液的吸光度，如吸光度 太高，可将样品稀释后再测定。 A.3.3 水分测定 按GB/T 6435的规定执行。 4 DB41/T 1906—2019 A.3.4 总氮含量测定 按GB/T 6432的规定执行。 A.3.5 结果计算 氨态氮的含量按公示进行计算： 式中： X ——氨态氮含量，单位为占总氮的质量百分比（%）； ρ ——样液的浓度，单位为毫摩尔每升（mmol/L）； D ——样液的总稀释倍数； M ——样品的水分含量，单位为百分比（%）； N ——试样的总氮含量，单位为占鲜样的质量百分比（%）； 以两个平行试样测定结果的算术平均值报告结果，保留一位小数。 5 DB41/T 1906—2019 附 录 B （资料性附录） 高效液相色谱法测定苜蓿青贮料有机酸含量 B.1 试剂和材料 乳酸、乙酸、丙酸、丁酸标准品，超纯水，色谱纯高氯酸。 B.2 仪器 高效液相色谱仪、SPD检测器、工作站、均质机。 B.3 测定程序 B.3.1 色谱条件 Shodex Rspak KC-811色谱柱（8 mm×300 mm，为离子交换柱），流动相为3 mol高氯酸溶液，流速 1 mL/min，SPD检测器波长210 nm，柱温50 ℃，进样量20 μL。 B.3.2 标准品分析 采用外标法，用乳酸、乙酸、丙酸、丁酸标准液制作标准工作曲线。根据试样浸提液中被测物含量 情况，选定浓度相近的标准工作曲线，对标准工作溶液与试样浸提液等体积参插进样测定，标准工作溶 液和试样浸提液乳酸、乙酸、丙酸、丁酸的响应值均应在仪器检测的线性范围内。按照色谱条件分析标 准品，乳酸、乙酸、丙酸、丁酸的保留时间分别约为8.1 min、9.6 min、11.2 min、13.8 min，标准品 的液相色谱图见图B.1。 图 B.1 乳酸、乙酸、丙酸、丁酸混合标准品的液相色谱图 注：LA为乳酸，AA为乙酸，PA为丙酸，BA为丁酸，mAU 为毫吸光度 B.3.3 空白实验 除不加试样浸提液外，按B.3.1和B.3.2条件和程序进行。 B.3.4 结果计算 6