ICS 65.020.01 B 15 DB23 黑龙江省地方标准 DB 23/T 2424—2019 马铃薯早疫病检测技术规程 2019 - 07 - 23 发布 2019 - 08 - 22 实施 黑 龙 江 省 市 场 监 督 管 理 局      发 布 DB23/T 2424—2019 前  言 本标准依据 GB/T 1.1-2009 的编写规则起草。 本标准由黑龙江省农业农村厅提出。 本标准由黑龙江省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：黑龙江省农业科学院马铃薯研究所、中国农业大学植物保护学院。 本标准主要起草人：胡林双、王晓丹、闵凡祥、高云飞、王文重、杨帅、魏琪、董学志、郭梅、盛 万民、白艳菊。 I DB23/T 2424—2019 马铃薯早疫病检测技术规程 1　范围 本标准规定了马铃薯早疫病田间检测和室内检测。 本标准适用于马铃薯植株和块茎早疫病检测。 2　规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 7331-2003 马铃薯种薯产地检疫规程 GB 8855 新鲜水果和蔬菜的取样方法 GB 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3　田间检测 3.1　抽样 抽样参照 GB 7331-2003 中 5.1.1.2 规定的方法执行。 3.2　田间症状鉴别 田间病株和薯块症状，以肉眼观察为主(参见附录A)。 4　室内检测 4.1　取样方法 取样方法参照 GB 8855 中规定执行。 4.2　实验用水 实验用水应符合 GB 6682 的规定。 4.3　试剂 NaClO、盐酸、75 % 酒精、无菌水、马铃薯葡萄糖琼脂（PDA培养基），所用试剂级别均为分析纯。 4.4　仪器和器具 培养箱、生物显微镜、无菌操作台、载玻片和盖玻片、培养皿、酒精灯、手术刀、灭菌锅等。 4.5　操作步骤 1 DB23/T 2424—2019 4.5.1 直接镜检 若样品发病部位已有霉层存在，可挑取其霉层直接镜检。若无霉层，则按以下步骤进行：将待检叶 片用蒸馏水清洗晾干后，放入保湿器皿中，放在 25 ℃ 培养箱内培养 1 d～4 d 后，挑取霉层直接镜检；将 待检块茎用自来水清洗后，用 1 % NaClO 溶液表面消毒 3 min～5 min，再用无菌水清洗 3 次，晾干，将块 茎切片或直接放入保湿器皿中，放在 25 ℃ 培养箱中暗培养 3 d～5 d 。挑取霉层直接镜检。 4.5.2 分离培养后镜检 用无菌刀片切取病健交界处的叶片或块茎病组织，面积约为 5 mm×5 mm 大小，放入 75 % 的酒精中进 行组织表面消毒 2 min ，用无菌水冲洗 3 次，再用无菌滤纸将叶片表面的水分吸干，放入无菌的 PDA 培 养基上。每个培养基上一般放置 3～4 片，在 25 ℃ 下恒温培养。3 d～4 d 后，在无菌条件下挑取病组织 周围长出的尖端菌丝，移入 PDA 培养基进行纯化培养。在 25 ℃ 光（光照强度大于 3000 lux，16 h）和暗 （8 h）交替恒温培养 4 d 左右，挑取少量菌丝，镜检。 4.6　结果判定 将压好的玻片放在生物显微镜下观察病原菌形态特征，如果镜下的分生孢子形态符合茄链格孢菌的 形态特征，则判定为马铃薯早疫病菌（参见附录B）。 2 DB23/T 2424—2019 附　录　A （资料性附录） 马铃薯早疫病主要典型症状 A.1　马铃薯早疫病叶片症状 在植株下部叶片或老叶上产生小的、近圆形、褐色至深褐色病斑，病斑可迅速扩大，其上产生黑色 同心轮纹和少量黑色霉层。严重时，整个病斑相互连接，但受叶脉限制成三角形或不规则形，最后穿孔， 叶片变黄，干枯，甚至脱落。见图A.1 。 图A.1 马铃薯早疫病叶片症状 A.2　马铃薯早疫病茎部症状 叶柄受害多发生于分枝处，病斑褐色，线条形，稍凹陷，扩大后呈灰褐色长椭圆形病斑，有轮纹。 见图A.2 。 3 DB23/T 2424—2019 图A.2 马铃薯早疫病茎部症状 A.3　马铃薯早疫病块茎症状 块茎被侵染后，产生暗褐色，稍凹陷，圆形或近圆形病斑，大小不等，有的病斑，直径可达 2 cm 。 边缘明显，皮下呈浅褐色、海绵状干腐，深度一般不超过 6 mm ，在老化的病斑上，可以产生裂缝。在 贮藏期间病斑可增大，块茎皱缩。见图A.3 。 图A.3 马铃薯早疫病块茎症状 4 DB23/T 2424—2019 AA 附　录　B （资料性附录） 茄链格孢菌 Alternaria solani 形态特征 B.1　马铃薯早疫病病原茄链格孢菌形态特征 马铃薯早疫病的病原为茄链格孢[Alternaria solani (E. & M.) Sorauer]。茄链格孢菌属于半知菌 （ Deuteromycota ），丝孢纲（ Hyphomycetes ），丛梗孢目（ Moniliales ），暗色孢科（ Dematiaceae ）。 分生孢子梗单生或丛生，长不超过 110 µm，宽 6 µm～10 µm 。分生孢子单生，倒棍棒形至长椭圆形， 淡金黄褐色至榄褐色，具长喙，表面光滑，9～11 个横隔膜，0 至数个纵隔膜，150 µm～300 µm×15 µm～ 19 µm 。喙长等于或长于孢身，有时有分枝，喙宽 2.5 µm～5 µm 。见图B.1 。 图 B.1 显微镜下马铃薯早疫病病原 Alternaria solani 分生孢子形态特征 5