ICS 65.020.20 B 31 DB32 DB32/T ×××× 江 苏 省 地 方 标 准 DB32/T 3652-2019 铁皮石斛嫩茎液体培育生产技术规程 Technical regulation of the cultivation for tender stems of Dendrobium officinale in submerged culture 2019-09-19 发布 2019-10-31 实施 江苏省市场监督管理局 发布 1 DB32/T3652—2019 前 言 本标准按 GB/T 1.1-2009《标准化工作导则 第 1 部分：标准的结构与编写规则》给出的规则编写。 本标准由江苏省农业科学院提出并归口。 本标准起草单位：苏州天成新农生物科技有限公司，江苏省农业科学院。 本标准起草人：张杰、周燕群、关剑、余向阳、杜平、王昕怡、吴红升。 2 DB32/T3652—2019 铁皮石斛嫩茎液体培育生产技术规程 1 范围 本标准规定了铁皮石斛嫩茎液体培育的术语和定义、生产条件、种源培育、培育生产、规模化生 产、日常管理、采收、质量等划分和包装、运输及贮存。 本标准适用于铁皮石斛嫩茎液体培育。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期引用文件，仅所注日期版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。 GB 5749 生活饮用水卫生标准 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 铁皮石斛嫩茎液体培育（The cultivation for tender stems of Dendrobium officinale in submerged culture） 从铁皮石斛中分离植物愈伤组织，经诱导分化及驯化筛选，利用离体培养生物技术扩增培育的无 农药残留、重金属含量较低、高醇浸出物含量铁皮石斛幼嫩茎的培育技术。 4 生产条件 室内环境为十万级以上洁净度的洁净间。保持室温 25oC~28oC。均匀柔和人工光，增补 4:1 红蓝 光，光照强度为 2000Lux，光暗周期 8h:16h。空气相对湿度 40%~70%。生产环境、生产用水和过滤水 应分别符合 GB 5749 和 GB/T 6682 的规定。 5 种源培育与增殖 5.1 培养基配制 采用 MS 培养基+0.5mg/L NAA+0.5mg/L KT+20 g/L 葡萄糖+10g/L 琼脂固体培养基进行种源细胞固 体培养。采用 MS 培养基+0.5mg/L NAA+0.5mg/L KT+20g/L 葡萄糖培养液进行种源细胞液体培养。 5.2 种源细胞增殖 3 DB32/T3652—2019 将成熟铁皮石斛茎段插入固体培养基中培养，获得愈伤组织细胞。在相同固体培养基条件下增殖 种源细胞。 5.3 种源细胞培育 按照鲜重 20g/L~30g/L 接种量，采用无菌操作，将种源细胞转接至 2L~5L 玻璃瓶中进行液体培养。 培养过程中向培养液中通入无菌空气，空气流速为 0.75L/min~1L/min，培养周期为 30d~45d。 6 培育生产 6.1 培养基配制 采用 MS 培养基+0.5mg/L NAA+1mg/L KT+20g/L 葡萄糖+5%麦芽糖培养基进行培养。 6.2 培育操作 按 40g/L~50g/L 接种量，将种源细胞转接至 10L 玻璃瓶中。在培养过程中，将无菌空气通入培养 瓶中，空气流速为 0.75L/min~1L/min，培养周期为 30d~45d。待嫩茎生长总体积至培养瓶总体积的 2/3 时，采收或留做下一阶段种源。 7 规模化生产 按 40 g/L~50 g/L 接种量，将采收的种源细胞转接至 50L~100L 生物反应器中培养生产，其它按本 标准第 6 章的规定执行。 8 日常管理 一旦发现细菌或真菌的污染，立即将污染品移出培育生产间并进行湿热高温灭菌。 9 采收 采收时剔除褐化植株，用过滤水缓慢冲洗嫩茎 3min~5min，300rpm/min 脱水离心 3min，甩脱浮水 后可直接制备成铁皮石斛嫩茎鲜品，或 65℃烘干制备为干品。 10 质量等级划分 铁皮石斛嫩茎质量等级划分要求见表 1。 表 1 铁皮石斛嫩茎质量等级划分要求 等级 特一级 特级 要 求 足干，形态规则，长度大于 6mm，嫩茎分枝簇状均一排列，翠绿色。 足干，形态基本规则，长度在 3~6mm，嫩茎偶见小嫩叶，黄绿或翠绿色。 4 DB32/T3652—2019 一级 足干，形态相似，长度在 1~3mm，嫩茎混有嫩叶，黄绿或翠绿色。 工业级 足干，形态相似，长度小于 1mm，嫩茎混有嫩叶，黄绿或翠绿色。 11 包装、运输、储存 11.1 包装 分级后分别密封包装，包装上应标注品名、规格、产地、生产批号、合格标志。 11.2 运输 运输工具应清洁、卫生，无毒、无污染。运输时应防潮、防暴晒、防污染。 11.3 贮存 贮存于阴凉、通风、清洁、干燥室内，不得与有毒、有害和有异味的物品同仓存放。 5