ICS 67.050 X 04 吉 DB22 林 省 地 方 标 准 DB 22/T 2908—2018 长白山林蛙油的测定 高效液相色谱法 Determination of changbai mountain ranae oviductus 2018 - 11 - 12 发布 吉林省市场监督管理厅 HPLC method 2018 - 12 - 30 实施 发 布 DB22/T 2908—2018 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 和 GB/T 20001.4-2015 给出的规则起草。 本标准由吉林省林业厅提出并归口。 本标准起草单位：吉林大学。 本标准起草人:王永生、徐阳、王诗涵、鲍慧玮、赵中原、崔庆艳、肖瑶、刘敏、王艳伟、房永清、 王道君、王仁祥、伊常青。 I DB22/T 2908—2018 长白山林蛙油的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了用高效液相色谱法对长白山林蛙油（Changbai mountain Ranae Oviductus）进行定 性测定。 本标准适用于长白山林蛙油的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 19507 地理标志产品 吉林长白山中国林蛙油 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 长白山林蛙油 changbai mountain ranae oviductus 长白山林蛙油是主产于长白山的林蛙油，即《中华人民共和国药典》2015版一部收载的哈蟆油，为 蛙科动物中国林蛙Rana temporaria chensinensis David雌蛙的输卵管，经采制干燥而得。 4 原理 通过长白山林蛙油高效液相色谱中的特征峰鉴别长白山林蛙油。 5 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 6 6.1 6.2 试剂或材料 除特别说明外，所有试剂均为分析纯。 无水乙醇（C2H5OH）。 二氯甲烷（CH2Cl2）。 甲醇（CH3OH）。 胆固醇对照品（供鉴别用）（C27H46O)。 色谱乙腈（C2H3N）。 仪器设备 天平（感量 0.00001 g）。 粉碎机（50 HZ~60 HZ）。 1 DB22/T 2908—2018 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9 6.10 6.11 6.12 6.13 6.14 6.15 6.16 7 40 目筛。 圆底烧瓶（100 mL）。 量筒（50 mL）。 水浴锅。 普通漏斗（100 mL）。 滤纸。 圆底烧瓶（250 mL）。 旋转蒸发仪。 循环水式真空泵。 容量瓶（2 mL）。 微孔滤膜（0.45 μm）。 容量瓶（100 mL）。 高效液相色谱仪。 十八烷基键合硅胶色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）。 样品 符合GB/T 19507要求的长白山林蛙油。 8 试验步骤 8.1 试样制备 取干燥长白山林蛙油适量（6.1），粉碎（6.2），过40目筛（6.3），置于室温下保存备用。 8.2 供试品溶液制备 8.2.1 精密称定上述粉末约 3 g（6.1），置于 100 mL 圆底烧瓶（6.4）中，加入无水乙醇（5.1）40 mL （6.5），80 ℃水浴回流提取 15 min（6.6），放冷，过滤（6.7，6.8），滤渣再同法提取 2 次，合并 滤液（6.9），减压回收乙醇（6.10，6.11），得提取物。 8.2.2 取上述提取物（8.2.1），加入适量二氯甲烷（5.2）溶解，并转移至 2 mL 的容量瓶（6.12）中， 挥干，加甲醇（5.3）定容至刻度，摇匀。用 0.45 μm 微孔滤膜（6.13）滤过，取续滤液，即得供试品 溶液。 8.3 对照品溶液制备 精密称取胆固醇对照品（5.4）约10 mg（6.1），置于10 mL容量瓶中（6.14），加甲醇溶解并定容 至刻度，配制成浓度为1 mg/mL的对照品溶液。 8.4 试验条件 高效液相色谱仪（6.15），十八烷基键合硅胶色谱柱（6.16）；流动相：乙腈（A）-水（B）梯度 洗脱（5.5，5.6），洗脱条件见表1；检测波长：215 nm；柱温：30 ℃；进样量：5 μL。 表1 2 流动相洗脱条件 DB22/T 2908—2018 8.5 时间 流动相 A 流动相 B 流速 min % % mL/min 0～20 0 100 1 20～27 0→12 100→88 2 27～29 76 24 2 29～40 76 24 0.5 40～55 76→85 24→15 1 55～63 85→100 15→0 2 63～80 100 0 2 试样测定 分别精密吸取对照品溶液5 μL（8.3）、供试品溶液5 μL（8.2），注入高效液相色谱仪（6.15）， 按“8.4”项下色谱条件进行测定，记录色谱图。 9 试验数据处理 供试品图谱中应有10个特征峰，与对照品参照物峰相应的峰为S峰（见附录A 图A,1），计算各特征 峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10%之内。规定值为：0.10（峰1）、0.24（峰 2）、0.28（峰3）、0.38（峰4）、0.67（峰5）、0.68（峰6）、0.71（峰7）、0.73（峰8）、0.74（峰 9）、1.00（峰S）（见附录A 图A.2）。 积分参数 斜率灵敏度为1.2；峰宽为0.1；最小峰面积为1.1；最小峰高为0.2。 10 试验报告 试验报告应包括下列内容： a) 本标准的名称和编号； b) 样品的详细信息； c) 试验条件； d) 试验结果； e) 在试验过程中观察到的任何异常现象； f) 试验日期。 3 DB22/T 2908—2018 AA 附 录 A （规范性附录） 对照品图谱和对照特征图谱 图A.1和图A.2给出了对照品图谱和对照特征图谱。 图A.1 对照品图谱 峰 S：胆固醇 图A.2 对照特征图谱 峰 S：胆固醇 _________________________________ 4