ICS 65.050 B 50 DB34 安 徽 省 地 方 标 准 DB 34/T 3304—2018 中草药中 16 种多环芳烃的测定 气相色谱质谱法 Determination of 16 sixteen polycyclic aromatic hydrocarbons in Chinese medicinal herbs- GC/MS method 文稿版次选择 2018 - 12 - 29 发布 安徽省市场监督管理局 2019 - 01 - 29 实施 发 布 DB34/T 3304—2018 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省检验检疫科学技术研究院提出。 本标准由安徽省动植物检验检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：安徽省检验检疫科学技术研究院、安徽中青检验检测有限公司、上海海关动植物 与食品检验检疫技术中心。 本标准主要起草人：周典兵、韩芳、丁磊、宋伟、吕亚宁、唐菲、胡艳云、盛旋、郑平、邓晓军。 I DB34/T 3304—2018 中草药中 16 种多环芳烃的测定 气相色谱质谱法 1 范围 本标准规定了中草药中萘、苊烯、苊、芴、菲、蒽、荧蒽、芘、苯并(a)蒽、屈、苯并(b)荧蒽、苯 并(k)荧蒽、苯并(a)芘、茚并(1,2,3-cd)芘、二苯并(a,h)蒽和苯并(g,h,i)苝等 16 种多环芳烃测定的 气相色谱质谱法。 本标准适用于黄芪、白芍、石斛、桑皮、番泻叶、菊花、绞股蓝、苦杏仁、茯苓等中草药中16种多 环芳烃的检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法原理 试样中多环芳烃用正己烷-丙酮溶液超声提取，采用凝胶渗透色谱仪净化，供气相色谱-质谱仪测定， 内标法定量。 4 试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。 4.1 正己烷：色谱纯。 4.2 丙酮：色谱纯。 4.3 环己烷：色谱纯。 4.4 乙酸乙酯：色谱纯。 4.5 正己烷+丙酮（1：1，体积比）：等体积的正己烷和丙酮互溶。 4.6 乙酸乙酯+环己烷（1：1，体积比）：等体积的乙酸乙酯和环己烷互溶。 4.7 标准物质：萘、苊烯、苊、芴、菲、蒽、荧蒽、芘、苯并(a)蒽、屈、苯并(b)荧蒽、苯并(k)荧蒽、 苯并(a)芘、茚并(1,2,3-cd)芘、二苯并(a,h)蒽和苯并(g,h,i)苝等 16 种多环芳烃标准储备液的浓度均 为 2 g/L，纯度 ≥99％。 4.8 氘代内标标准物质：氘代萘-D8，氘代苊 D10,氘代-菲 D10，氘代-屈 D12 和氘代-苝 D12 混合氘代 内标标准储备液的浓度均为 2 g/L，纯度 ≥99％。 4.9 多环芳烃标准使用溶液（2000 μg/L）：准确吸取适量体积的混合标准贮备溶液(4.7)，用正己烷 （4.1）稀释至所需浓度，保存于 -18℃冰箱。 1 DB34/T 3304—2018 4.10 多环芳烃内标使用溶液（2000 μg/L）：准确吸取适量体积的混合内标标准贮备溶液(4.8)，用正 己烷（4.1）稀释至所需浓度，保存于 -18℃冰箱。 4.11 多环芳烃混合标准工作溶液：吸取适量多环芳烃标准使用溶液（4.9）和适量多环芳烃内标使用 溶液（4.10）用正己烷配制成多环芳烃浓度为 2 μg/L、10 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、200 μg/L、500 μg/L 和含内标物浓度为 50 μg/L 的混合标准工作溶液。 5 仪器和设备 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 5.8 5.9 6 气相色谱-质谱仪：配有 EI 源。 凝胶渗透色谱仪。 分析天平：感量为 0.01 g。 旋转蒸发仪。 离心机：不低于 5000 r/min。 氮吹仪。 涡旋混合器。 超声波清洗器。 粉碎机。 试样制备与保存 取代表性黄芪、白芍、石斛、桑皮、番泻叶、菊花、绞股蓝、苦杏仁、茯苓等样品取不少于 200 g， 用粉碎机粉碎，过 60 目筛，取通过筛网的药材粉末装入洁净的容器内，密闭并标明标记，于 0℃～4℃ 保存。 7 分析步骤 7.1 提取 称取 2 g（精确至 0.01 g）样品于 50 mL 离心管中，向其中添加 50 μL 2000 μg/L 的 5 种 PAHs-D 混标，加入 20 m L 正己烷-丙酮(1:1,v/v)混合溶液超声提取 30 min，5000 r/min 离心 5 min，移取 上清液于 100 mL 磨口烧瓶中。再向离心管中加入 20 m L 正己烷-丙酮(1:1,v/v)混合溶液，重复提取 一次，合并提取液于上述磨口烧瓶中，40℃水浴下旋转蒸发近干，用 10 mL 乙酸乙酯-环己烷（4.6） 涡旋溶解残渣，过有机相滤膜转入进样管中准备净化。 7.2 凝胶渗透色谱净化 以流速 5.0 mL/min 乙酸乙酯+环己烷（1：1，体积比）为流动相，进样 5 mL，收集 26 min～51 min 的馏分，收集液于 40℃水浴中旋转浓缩至近干，用乙酸乙酯-环己烷（4.6）转移到 5 mL 带刻度的离 心管中，于 40℃水浴中氮气吹至近干，以正己烷定容到 1.0 mL，涡旋溶解，待测。 8 气相色谱-质谱联用仪测定（GC-MS） 8.1 GC-MS 分析条件 a) 2 色谱柱：DB-5 MS，30 m  0.25 mm  0.25 µm，或相当者； DB34/T 3304—2018 b) c) d) e) f) g) h) i) j) k) l) 8.2 柱温：初始温度 80℃，保持 1 min，以 25℃/min 升温至 230℃，保持 6 min，再以 10℃/min 升温至 300℃，保持 6 min； 进样口温度：280℃； 色谱-质谱接口温度：280℃； 离子源温度：230℃； 载气：氦气，流速 1.1 mL/min，纯度≥99.999％； 进样量：1.0 µL； 进样方式：不分流进样； 电离方式：EI； 离子化能量：70 eV； 数据采集模式：SIM(参见附录 A)； 溶剂延时：3.5 min。 定性测定 根据色谱峰的保留时间并按照附录B 中多环芳烃的定性离子进行定性分析，定性依据为： a) 在相同的测试条件下被测样品色谱峰的保留时间与标准工作液相一致； b) 每个组分至少要选择监测 3 个特征离子，被测样品的监测离子的相丰度与标准工作溶液的相 对丰度两者之差应符合表 1 要求。 表1 定性离子相对丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 ＞50％ ＞20％至 50％ ＞10％至 20％ ≤10％ 允许的相对偏差 ±10％ ±15％ ±20％ ±50％ 8.3 定量测定 按 8.1 仪器条件对混合标准工作溶液(4.11)和待测溶被(7.2)进行分析，按照附录A 中的定量离子 和指定的内标物质，以标准溶液中被测组分峰面积和内标物质峰面积的比值为纵坐标，标准溶液中被测 组分浓度和内标物质浓度的比值为横坐标绘制标准曲线，用标准曲线对试样进行定量，试样溶液中待测 物的响应值均应在本方法线性范围内。 8.4 空白试验 除不加试样外，均按上述分析步骤进行。 9 结果计算 测试溶液中多环芳怪含量由仪器工作站按内标法自动计算。试样中多环芳烃的含量按式(1)计算， 计算结果需扣除空白值。 Xi  ci  V  1000 .................................... (1) m 式中： Xi —— 试样中多环芳烃 i 组分的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； ci —— 测定溶液中多环芳烃 i 组分的含量，单位为微克每升（μg/L）； v —— 试样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； m —— 试样液所代表试样的质量，单位为克（g）。 3 DB34/T 3304—2018 注：含量大于等于10 μg/kg时，保留三位有效数字；含量小于10 μg/kg，保留两位有效数字。 10 定量限 本方法多环芳烃的定量限参见附录A。 11 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 20％。 4 DB34/T 3304—2018 AA 附 录 A （资料性附录） 16 种多环芳烃和内标物的保留时间、定性离子、定量离子和定量限 表A.1 序号 16 种多环芳烃和内标物的保留时间、定性离子、定量离子和定量限 化学名称 特征碎片离子 保留时间 定量限 （min） 定性 定量 萘-D8 4.431 136,108,137 136 1 萘 4.446 128,127,102 128 5 2 苊烯 6.010 152,76,63 152 5 3 苊 6.189 152,76,63 152 5 4 芴 6.692 166,165,139 166 5 苊-D10 6.156 164,162,160 164 5 菲 7.708 178,152,89 178 5 6 蒽 7.762 178,152,89 178 5 内标3 菲-D10 7.681 188,94,80 188 7 荧蒽 9.631 202,200,101 202 5 8 芘 10.142 202,200,101 202 5 9 苯并[a]蒽 14.649 228,114,101 228 5 10 屈 14.801 228,114,101 228 5 屈-D12 14.703 240,236,120 240 11 苯并[b]荧蒽 18.348 252,126,113 252 5 12 苯并[k]荧蒽 18.432 252,126,113 252 5 13 苯并[a]芘 19.130 252,126,113 252 5 14 茚苯[1,2,3-cd]芘 21.992 276,277,138 276 5 15 二苯并[a, h]蒽 22.084 278,276,138 278 5 16 苯并[g, h, i] 芘 22.680 276,277,138 276 5 苝-D12 19.282 264,263,260 264 内标1 内标2 内标4 内标5 （μg/kg）