ICS 65.120 B 46 DB21 辽 宁 省 地 方 标 准 DB21/T 3060—2018 饲料中香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、 乙酸异戊酯 、γ—壬内酯、肉桂酸甲酯、 乙基麦芽酚、大茴香脑的含量测定 气相色谱法 Detection of vanillin , ethyl vanillin, cinnamaldehyde, peach aldehyde , isoamyl acetate, gamma-nonanolactone , methyl cinnamate ，ethylmaltol and anethole in feedstuffs by gas chromatography 2018 - 10 - 30 发布 辽宁省市场监督管理局 2018 - 11 - 30 实施 发 布 DB21/T 3060—2018 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 和 GB/T 20001.4-2015 给出的规则起草。 本标准由辽宁省畜牧兽医局提出并归口。 本标准起草单位：辽宁省兽药饲料畜产品质量安全检测中心。 本标准主要起草人：郭国贤、张明、张秀芹、王丽娜、刘雪红、张雪娇、苗翠、兰雨濛、侯广正。 I DB21/T 3060—2018 饲料中香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、γ—壬内 酯、肉桂酸甲酯、乙基麦芽酚、大茴香脑的含量测定 气相色谱法 1 范围 本标准规定了配合饲料、复合预混合饲料、浓缩饲料、精料补充料中香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、 桃醛、乙酸异戊酯、γ—壬内酯、肉桂酸甲酯、乙基麦芽酚、大茴香脑的气相色谱测定方法。 本标准适用于配合饲料、复合预混合饲料、浓缩饲料、精料补充料中香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、 桃醛、乙酸异戊酯、γ—壬内酯、肉桂酸甲酯、乙基麦芽酚、大茴香脑的含量测定。 本方法的检出限为20 mg/kg，定量限为50 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。 GB/T 14699.1（ISO 6497 IDT） 饲料 采样 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 原理 试样中香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、γ—壬内酯、肉桂酸甲酯、乙基麦芽酚、 大茴香脑用无水乙醇超声提取，提取液过滤膜后以氮气作为载气，使用气相色谱氢火焰检测器测定，外 标定量法。 4 试剂或材料 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂。 4.1 化学试剂：无水乙醇。 4.2 标准品：香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、γ—壬内酯、肉桂酸甲酯、乙基麦芽 酚、大茴香脑纯度均≥98.5%。 4.3 混合标准贮备溶液：分别称取香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、γ—壬内酯、肉 桂酸甲酯、乙基麦芽酚、大茴香脑标准品 100 mg（精确至 0.1mg），置于同一棕色 10 mL 容量瓶中， 用无水乙醇（4.1）溶解并定容，配成浓度为 10 mg/mL 的标准贮备溶液。2～8℃密封保存，有效期为 3 个月。 4.4 混合标准中间溶液：准确移取香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、γ—壬内酯、肉 桂酸甲酯、乙基麦芽酚、大茴香脑混合标准贮备溶液（4.3）1 mL 置于 10 mL 棕色容量瓶中，用无水乙 醇（4.1）定容至刻度。该溶液的浓度为 1mg/mL。2℃～8℃密封保存，有效期为 1 个月。 1 DB21/T 3060—2018 4.5 混合标准工作溶液：准确移取香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、γ—壬内酯、肉 桂酸甲酯、乙基麦芽酚、大茴香脑混合标准中间溶液(4.4)适量，用无水乙醇（4.1）稀释成浓度分别为 5、 10、20、50、100、200、500 g/mL 的标准工作溶液。现用现配。 5 仪器设备 5.1 分析天平：感量为 0.1 mg； 5.2 气相色谱仪：配氢火焰检测器(FID)和程序升温的柱温箱； 5.3 微孔滤膜：0.45 μm，有机相。 6 试样制备 制样过程中应防止样品受到污染或含量发生变化。 按GB/T 14699.1的规定，取饲料样品500 g，按GB/T 20195规定制备试样，粉碎过0.45 mm孔径筛， 充分混匀，装入磨口瓶中备用。 7 分析步骤 7.1 提取 称取试样约1 g（精确至0.1 mg），置于10 mL棕色容量瓶中，加5 mL无水乙醇（4.1），超声20min， 降至室温后，用无水乙醇（4.1）定容至刻度。混匀后静置。取上清溶液，溶液过0.45 µm的微孔滤膜， 供上机测定。 同时做试剂空白试验。 7.2 测定 7.2.1 气相色谱参考条件 色谱柱： DB-5毛细管柱，长60 m，内径0.25 mm，膜厚0.25 µm，或性能类似的色谱柱； 载气：高纯氮气，2.0mL/min； 分流比：10:1； 进样口温度：270℃； 检测器：氢火焰检测器； 检测器温度：290℃； 柱温箱温度：起始温度90℃，保持2min，以15℃/min升至200℃，保持8min； 进样量：1.00 L。 7.2.2 测定 在仪器最佳工作条件下，取混合标准工作溶液（4.5，从低浓度到高浓度）和试样溶液分别上机测 定，以混合标准工作液中香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、γ—壬内酯、肉桂酸甲酯、 乙基麦芽酚、大茴香脑峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准工作曲线，对样品进行定量。试样溶液 中香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、γ—壬内酯、肉桂酸甲酯、乙基麦芽酚、大茴香 脑的响应值应在标准工作曲线测定的线性范围内。超出线性范围的则用无水乙醇（4.1）适当稀释后再 2 DB21/T 3060—2018 进样分析。在上述色谱条件下，香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、γ—壬内酯、肉桂 酸甲酯、乙基麦芽酚、大茴香脑标准溶液色谱图见附录A。 8 试验数据处理 试样中香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、γ—壬内酯、肉桂酸甲酯、乙基麦芽酚、 大茴香脑的含量以质量分数Xi计，单位为毫克每千克(mg/kg)，按式(1)计算： Xi  C V n m =………………………（1） 式中： C ——由标准曲线计算所得的试样中香兰素、乙基香兰素、肉桂醛、桃醛、乙酸异戊酯、γ—壬内 酯、肉桂酸甲酯、乙基麦芽酚、大茴香脑的浓度，单位为微克每毫升（g/mL）； m——试样的质量，单位为克（g）； n——稀释倍数； V——样品定容体积，单位为毫升（mL）。 平行测定结果用算术平均值表示，结果保留3位有效数字。 9 精密度 在同一实验室，由同一操作人员完成的两个平行测定结果，相对偏差不大于20%。 3 DB21/T 3060—2018 AA 附 录 A （资料性附录） 9 种香味剂标准溶液的色谱图 图A.1给出了9香味剂标准溶液的色谱图 1—乙酸异戊酯 2—乙基麦芽酚 3—肉桂醛 4—大茴香脑 5—γ—壬内酯 6—肉桂酸甲酯 7—香兰素 8—乙基香兰素 9—桃醛 图 A.1 9香味剂标准溶液的色谱图（浓度为50 g/mL） 空白饲料色谱图 图 A.2给出了9种香味剂空白的色谱图 4 DB21/T 3060—2018 图A.2空白饲料色谱图 图 A.3给出了添加混合标样的样品色谱图 1—乙酸异戊酯 2—乙基麦芽酚 3—肉桂醛 4—大茴香脑 5—γ—壬内酯 6—肉桂酸甲酯 7—香兰素 8—乙基香兰素 9—桃醛 图 A.3 添加混合标样（20µg/mL）的样品色谱图 _________________________________ 5