ICS 65.020.20 B 38 DB34 安 徽 省 地 方 标 准 DB 34/T 3303—2018 药食两用花卉原料中 8 种新烟碱类农药残 留的测定 液相色谱串联质谱法 Determination of 8 neonicotinoid pesticides residues in material of medicine-food flowers LC-MS/MS method 文稿版次选择 2018 - 12 - 29 发布 安徽省市场监督管理局 2019 - 01 - 29 实施 发 布 DB34/T 3303—2018 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省检验检疫科学技术研究院提出。 本标准由安徽省动植物检验检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：安徽省检验检疫科学技术研究院、安徽国泰众信检测技术有限公司、上海出入境 检验检疫局动植物与食品检验检疫技术中心 本标准主要起草人：宋伟、韩芳、肖昱、丁磊、陈洪周、周典兵、吕亚宁、邓晓军、盛旋、胡艳云、 郑平。 I DB34/T 3303—2018 药食两用花卉原料中 8 种新烟碱类农药残留的测定 液相色谱串联质谱法 1 范围 本标准规定了药食两用花卉原料中吡虫啉、氯噻啉、噻虫嗪、噻虫胺、噻虫啉、啶虫脒、呋虫胺、 烯啶虫胺 8 种新烟碱类农药残留量的液相色谱串联质谱检测方法。 本标准适用于玫瑰、茉莉、金银花、菊花等药食两用花卉原料中氯噻啉、噻虫嗪、噻虫胺、噻虫啉、 啶虫脒、呋虫胺、烯啶虫胺 8 种新烟碱类农药残留量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法原理 样品中多种新烟碱类农药经乙腈均质提取，经固相萃取柱净化、氮吹浓缩后定容。液相色谱-串联 质谱测定，外标法定量。 4 试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 4.1 氯化钠：分析纯。 4.2 乙腈：色谱纯。 4.3 甲酸：色谱纯。 4.4 无水硫酸镁（MgSO4）：分析纯，经 650℃灼烧 4 h，储于干燥器中，冷却后备用。 4.5 标准品：吡虫啉、氯噻啉、噻虫嗪、噻虫胺、噻虫啉、啶虫脒、呋虫胺、烯啶虫胺，纯度均大于 98％。 4.6 固相萃取（SPE）柱：ENVI-CarbⅡ/PSA 柱，6 mL，500 mg 或相当者。 4.7 新烟碱类农药标准储备溶液的配制：准确称取适量标准品（精确至 0.01 mg），用乙腈溶解，配制 成浓度为 100 μg/mL 标准贮备溶液，-18℃下避光保存，可使用一年。 4.8 标准中间溶液：吸取 100 μL 标准溶液（4.7），移入 10 mL 棕色容量瓶，用乙腈定容，该溶液浓 度为 1.0 μg/mL。0℃～4℃冰箱保存，可使用一个月。 4.9 标准工作溶液：根据需要，吸取适量标准中间溶液（4.8），配制成适用浓度的标准工作液，使用 前配置。 4.10 滤膜：0.22 μm，有机系。 1 DB34/T 3303—2018 5 仪器和设备 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 5.8 6 液相色谱串联四级杆质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）。 分析天平：感量为 0.01 g。 旋涡混合器。 离心机：8000 r/min。 均质器：10000 r/min。 旋转蒸发仪。 氮吹浓缩仪。 粉碎机。 试样制备与保存 6.1 6.2 7 制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量变化。 将样品放入粉碎机中粉碎，装袋置于 0～4℃下保存，并标明标记。 测定步骤 7.1 提取 称取粉碎均匀的样品 2 g（精确到 0.01 g）于具塞离心管中，加入 3 mL 水，以 10000 r/min 高 速均质 1 min，静置 5 min。加入 2.0 g 氯化钠、20 mL 乙腈，涡旋混匀 1 min，8000 r/min 离心 5 min，上清液移入鸡心瓶中，残渣再用 20 mL 乙腈重复提取一次，上清液并入鸡心瓶中，45℃水浴旋转 浓缩至约 2 mL，待净化。 7.2 净化 在 ENVI-CarbⅡ/PSA 柱中加入约 2 cm 高无水硫酸钠，用 3 mL 乙腈预洗柱，弃去淋洗液。当液 面到达硫酸钠顶部时，迅速将柱子放入下接 10 mL 玻璃管的固定架上，并将样品提取液转移至净化柱 上，再用 2 mL 乙腈润洗各鸡心瓶 3 次，并倾入柱中。 收集的流出液于 35℃水浴氮吹浓缩至近干，乙腈 + 0.05％甲酸（5 + 95）定容至 1.0 mL，过 0.22 μm 滤膜，清液供液相色谱串联质谱测定。 7.3 测定 7.3.1 7.3.1.1 7.3.1.2 7.3.1.3 7.3.1.4 7.3.1.5 2 液相色谱参考条件： 液相色谱柱： C18 柱，2.1×50 mm（内径），1.8 μm，或相当者； 流动相：0.05％甲酸水-乙腈，梯度洗脱（梯度洗脱时间表见表 1）； 流速：0.4 mL/min； 柱温：40 ℃； 进样量：10.0 µL。 DB34/T 3303—2018 表1 7.3.2 液相色谱梯度洗脱条件 时间 流速 乙腈 0.05％甲酸水 / (min) /（mL/min） /（％） /（％） 0.0 0.4 5 95 0.5 0.4 5 95 1.0 0.4 30 70 2.0 0.4 30 70 3.0 0.4 80 10 5.0 0.4 80 10 5.5 0.4 5 95 10.0 0.4 5 95 质谱参考条件 7.3.2.1 离子源：电喷雾离子源（ESI）； 7.3.2.2 扫描方式：正离子扫描； 7.3.2.3 检测方式：多反应监测（MRM）； a) 使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求；详细条件参见附录 A.2； b) 毛细管电压、雾化气压力、气帘气压力、辅助气流速、碎裂电压（FP）、碰撞气能量（CE）等 参数应优化至最优灵敏度，参考条件和定性离子对、定量离子参见附录 A.2。 7.3.3 定量测定 取空白样品按照 7.1-7.2 处理，配制适用浓度的基质匹配标准工作液，按浓度由低到高进样检测， 以定量子离子峰面积-浓度作图，得到基质匹配标准曲线。在上述色谱条件下，各新烟碱类农药参考保 留时间、色谱行为参见附录B。 待测样液中各新烟碱类农药的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应稀释至相应范围 内再进样分析。 7.3.4 定性确证 在相同实验条件下，试样中待测物质的保留时间与标准工作溶液中对应的标准物质保留时间偏差在 ±2.5％之内；在试样谱图中所选择的待测物离子对均出现，且相对丰度与标准工作溶液中定性离子的 相对丰度允许偏差不超过表2 规定的范围时，则可确定为样品中存在相应的目标化合物。 表2 8 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对丰度 ＞50％ ＞20％至 50％ ＞10％至 20％ ≤10％ 允许的相对偏差 ±20％ ±25％ ±30％ ±50％ 空白试验 除不加试样外，均按上述步骤进行。 9 结果计算 3 DB34/T 3303—2018 结果按式（1）计算。 X  A  C V AS  m ................................... (1) 式中： X ——新烟碱类农药残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）； A ——样液中新烟碱类农药峰面积； C ——标准工作溶液中新烟碱类农药的浓度，单位为微克每升（μg/L）； V ——样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； AS ——标准工作溶液中新烟碱类农药峰面积； m ——试样的质量，单位为克（g）。 注：计算结果需将空白值扣除。 10 测定低限和回收率 10.1 测定低限 本标准中吡虫啉、氯噻啉、噻虫嗪、噻虫胺、噻虫啉、啶虫脒、呋虫胺、烯啶虫胺测定低限均为 5.0 μg/kg。 10.2 回收率 药食两用花卉原料中 8 种新烟碱类农药不同添加水平的平均回收率数据参见附录C。 4 DB34/T 3303—2018 AA 附 录 A （资料性附录） 仪器参数 液相色谱-串联质谱仪器参数参考条件如下： 监测离子对及电压参数 a) 电喷雾电压：4000 V； b) 雾化气压力：40 psi； c) 离子源温度：300℃； d) 干燥气流速：10 L/min； e) 驻留时间：30 ms； f) 定量离子对、定性离子对的碎裂电压（FP）、碰撞气能量（CE）见表 A.1。 表A.1 名称 吡虫啉 氯噻啉 噻虫嗪 噻虫胺 噻虫啉 啶虫脒 呋虫胺 烯啶虫胺 8 种新烟碱类农药的定量离子对、定性离子对 FP、CE 定性离子对 256.1/175.1 256.1/209 262.0/181.1 262.0/122.2 292.1/211.1 292.1/181.1 250.2/132.0 250.2/169.1 253.0/126.0 253.0/186.0 223.1/126.0 223.1/56.1 203.3/129.2 203.3/114.0 271.0/237.0 271.0/224.0 定量离子对 256.1/175.1 262.0/181.1 292.1/211.1 250.2/132.0 253.0/126.0 223.1/126.0 203.3/129.2 271.0/237.0 FP CE （V） （V） 88 17 88 13 106 14 106 28 80 10 80 20 80 15 80 10 120 15 120 10 108 21 108 13 90 5 90 5 100 15 100 15 5 DB34/T 3303—2018 BB 附 录 B （资料性附录） 色谱图 8 种新烟碱类农药标准品多反应监测色谱图 图B.1 6 新烟碱类农药标准品多反应监测色谱图 DB34/T 3303—2018 CC 附 录 C （资料性附录） 回收率数据 表C.1 样品名称 吡虫啉 氯噻啉 噻虫嗪 噻虫胺 噻虫啉 啶虫脒 呋虫胺 烯啶虫胺 回收率数据 回收率范围 添加浓度 /（μg/kg） （％） 玫瑰 茉莉 金银花