ICS 65.120 B 46 吉 DB22 林 省 地 方 标 准 DB 22/T 2965—2019 饲料中精神类药物的测定 液相色谱-质谱/ 质谱法 Determination of Psychiatric drugs in feeds—LC-MS/MS method 2019 - 05 - 27 发布 吉林省市场监督管理厅 2019 - 06 - 17 实施 发 布 DB22/T 2965—2019 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009和GB/T 20001.4-2015给出的规则起草。 本标准由吉林出入境检验检疫局提出并归口。 本标准起草单位：吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心、长白海关。 本标准主要起草人：胡婷婷、赵韫慧、王岸英、宋清莲、杨璐、张琦、郭蕊、顾婷婷、孙群。 I DB22/T 2965—2019 饲料中精神类药物的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1 范围 本标准规定了饲料中精神类药物液相色谱-质谱/质谱测定方法的原理、试剂或材料、仪器设备、样 品、试验步骤、试验数据处理、精密度及试验报告。 本标准适用于配合饲料、预混合饲料及浓缩饲料中地西泮、咪达唑仑、利血平、硝西泮、奥沙西泮、 艾司唑仑、三唑仑和氯丙嗪等8种精神类药物的测定。 本方法饲料中地西泮、咪达唑仑、利血平、硝西泮、奥沙西泮、艾司唑仑、三唑仑和氯丙嗪等8种 精神类药物的检出限为5.0 g/kg，定量限为15.0 g/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 原理 试样中的精神类药物用0.5%甲酸乙腈提取，经Prime HLB固相萃取柱净化，液相色谱-质谱/质谱仪 测定，外标法定量。 4 试剂或材料 除另有规定，仅用分析纯试剂。 4.1 水，GB/T 6682，一级。 4.2 8 种精神类药物标准物质：地西泮，C16H13ClN2O，CAS 号：439-14-5；咪达唑仑，C18H13N3FCl，CAS 号：59467-70-8；利血平，C33H40N2O9，CAS 号：50-55-5；硝西泮，C15H11N3O3，CAS 号：146-22-5；奥沙 西泮，C15H11ClN2O2，CAS 号：604-75-1；艾司唑仑，C16H11ClN4，CAS 号：29975-16-4；三唑仑，C17H12Cl2N4， CAS 号：28911-01-5；氯丙嗪，C17H19ClN2S，CAS 号：50-53-3。 4.3 乙腈（CH3CN）：色谱级。 4.4 甲酸（HCOOH）：优级纯。 4.5 甲醇（CH3OH）：色谱级。 4.6 0.5%甲酸乙腈溶液：量取 0.5 mL 甲酸（4.4）和 99.5 mL 乙腈（4.3），混匀备用。 4.7 0.1%甲酸溶液：量取 1 mL 甲酸（4.4）和 999 mL 水（4.1），混匀备用。 4.8 0.1%甲酸溶液-乙腈（4+1）：量取 80 mL0.1%甲酸溶液（4.7）和 20 mL 乙腈（4.3），混匀备用。 4.9 标准储备溶液：分别准确称取 8 种精神类药物标准品 100 mg（精确到 0.1 mg），用甲醇（4.5） 溶解并定容于 100 mL 棕色容量瓶中，配制成浓度为 1 000 g/mL 的标准储备液，-18 ℃条件下保存 6 个月。 4.10 空白样品提取液：用不含 8 种精神类药物残留的样品，参照 7.1 制备空白样品提取液。 1 DB22/T 2965—2019 4.11 标准工作液：根据需要将 8 种精神类药物标准储备溶液用空白样品提取液（4.10）稀释成适用 浓度的标准工作溶液。现用现配。 4.12 Prime HLB 固相萃取柱：200 mg/6 mL 或相当者。使用前用 5 mL 乙腈活化。 4.13 滤膜：0.22 m，有机系。 5 仪器设备 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 6 液相色谱-质谱/质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI）。 天平：感量为 0.01 g 和 0.0 001 g。 样品粉碎机。 高速离心机：10 000 r/min。 超声波清洗机。 涡旋混合器。 旋转蒸发仪。 样品 6.1 按 GB/T 14699.1 的规定抽取有代表性的样品，用四分法缩减取样。 6.2 按照 GB/T 20195 的规定制备样品，粉碎过 0.45 mm 孔径筛，混合均匀，装入磨口瓶中备用。 7 试验步骤 7.1 提取 称取5 g（精确至0.01 g）饲料样品于50 mL具塞离心管中，加入20 mL0.5%甲酸乙腈（4.6）涡旋1 min， 超声提取10 min后，于10 000 r/min离心5 min，再用20 mL0.5%甲酸乙腈（4.6）重复提取一次，合并 提取液于鸡心瓶中，旋转蒸发至10 mL ~15 mL，待净化。 7.2 净化 Prime HLB固相萃取柱（4.12）用5 mL乙腈（4.3）活化，将7.1中提取液全部过柱，再用2 mL0.5% 甲酸乙腈（4.6）充分洗涤鸡心瓶，洗涤液上柱，接收全部流出液，依次用5 mL乙腈（4.3）、5 mL0.5% 甲酸乙腈（4.6）冲洗固相萃取柱，接收全部流出液，旋转蒸发至近干后，用1 mL0.1%甲酸溶液-乙腈（4+1） （4.8）定容，过滤膜后待测定。 7.3 空白试验 除不加样品外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。 7.4 测定 7.4.1 色谱参考条件 色谱参考条件如下： a) 色谱柱： C18 色谱柱， 150 mm×2.0 mm，3.5 m 或相当者； b) 流动相：A:0.1%甲酸溶液；B：乙腈；梯度洗脱条件参见表 1； c) 流速：0.25 mL/min； 2 DB22/T 2965—2019 d) 进样量：10 L。 表1 7.4.2 梯度洗脱条件 时间 A B min % % 0.0 80 20 2.0 80 20 4.0 40 60 9.0 20 80 11.0 20 80 11.1 80 20 15.0 80 20 质谱参考条件 本标准所使用的质谱参考条件如下： a) 电离方式：电喷雾电离（ESI）； b) 扫描方式：正离子扫描，多反应监测（MRM）； c) 电离电压：5.5 kV； d) 离子源温度：550 ℃； e) 气帘气压力（CUR）：0.75 MPa； f) 雾化气压力：1.5 MPa； g) 辅助气压力：1.5 MPa； h) 定性离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞能量见表 2。 表2 化合物 地西泮 咪达唑仑 利血平 硝西泮 8 种精神类药物定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞能量 分子式 C16H13ClN2O C18H13N3FCl C33H40N2O9 C15H11N3O3 母离子 子离子 碰撞能量 去簇电压 m/z m/z V V 154.1* 37 40 193.1 44 40 291.2* 38 40 249.1 53 40 397.4* 37 70 448.3 42 70 236.1* 34 60 180.1 50 60 精确分子量 284.07 325.08 608.27 281.08 285.1 326.1 609.3 282.1 3 DB22/T 2965—2019 表2 8种精神类药物定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞能量 （续） 化合物 奥沙西泮 艾司唑仑 三唑仑 氯丙嗪 分子式 母离子 子离子 碰撞能量 去簇电压 m/z m/z V V 269.0* 21 80 241.2 30 80 267.1* 31 90 205.1 83 90 308.1* 37 100 315.1 37 100 86.1* 30 60 58.0 67 60 精确分子量 C15H11ClN2O2 286.05 C16H11ClN4 287.1 294.07 C17H12Cl2N4 295.1 342.04 C17H19ClN2S 343.1 318.10 319.1 注：加“*”的为定量离子。 7.4.3 标准工作曲线 将浓度分别为 25.0 g/L、50.0 g/L、100.0 g/L、150.0 g/L、200.0 g/L 的 8 种精神类药物 标准工作溶液，按参考色谱和质谱条件测定。分别以 8 种精神类药物质量浓度为横坐标，相应的峰面积 响应值为纵坐标，进行线性回归分析。 7.4.4 定性分析 在同一色谱/质谱条件下进行标准溶液和样品溶液的测定，如果样品溶液中检出的色谱峰的保留时 间与标准物质色谱峰的保留时间一致，所选择的两对子离子的质荷比也一致，而且样品定性离子的相对 丰度与浓度相当标准工作溶液的定性离子的相对丰度相比较，相对偏差不超过表3规定的范围，则可判 定样品中存在该物质。标准溶液的多反应监测色谱图参见附录A。 表3 定性分析时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度/% ＞50 20～50 10～20 ≤10 允许的相对偏差/% ±20 ±25 ±30 ±50 7.4.5 定量测定 平行做两份测定。标准工作液和样液中被测组分的响应值均应在仪器线性响应范围内。在上述色谱 条件下，8种精神类药物的参考保留时间为参见附录A，外标法定量。标准溶液的多反应监测色谱图参见 附录A。 8 试验数据处理 用色谱数据处理机或按公式（1）计算样品中8种精神类药物残留含量，计算结果需扣除空白值。 4 DB22/T 2965—2019 X  c V ……………………….………………… (1) m 式中： X —— 样品中被测组分含量，单位为微克每千克（g/kg）； c —— 被测组分溶液浓度，单位为微克每升（g/L）； V —— 样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； m ——样液所代表的最终样品的质量，单位为克（g）； 计算结果保留三位有效数字。 9 9.1 精密度 重复性 在同一实验室，由同一操作者使用相同设备，按相同的测试方法，并在短时间内对同一被测对象相 互独立进行测试获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均